T_ZNZ 252-2024 配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定和毒力基因的检测.docxVIP

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T/ZNZ

浙江省农产品质量安全学会团体标准

T/ZNZ252—2024

配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定和毒力基因的检测

TheisolationandidentificationofBacilluscereusinpowderedformulaandthedetectionofitsvirulencegenes

2024-04-01发布2024-05-01实施

浙江省农产品质量安全学会发布

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T/ZNZ252—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。

本文件起草单位：浙江大学动物科学学院、国科大杭州高等研究院、贝因美股份有限公司、浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所。

本文件主要起草人：乐敏、唐标、尹睿、滕霖、廖思豪、冯梦瑶、李艳、熊丽娜、高悦华、张艺。

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配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定和毒力基因的检测

1范围

本文件规定了配方乳粉来源的蜡样芽胞杆菌（Bacilluscereus）的分离鉴定和定量检测方法中的设备和材料、培养基和试剂、样品制备与菌株分离鉴定、平板计数法（第一法）、MPN计数法（第二法）、毒力基因的PCR检测及生物安全的要求。

本文件适用于配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定和毒力基因的检测。

本文件第一法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的配方乳粉样品中蜡样芽胞杆菌的检验计数；第二法适用于蜡样芽胞杆菌含量较低的配方乳粉样品中蜡样芽胞杆菌的检验计数。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则

GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定

GB4789.14食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4设备和材料

4.1设备

用于细菌分离的微生物实验室应符合GB19489生物安全二级实验室（BSL-2）要求，灭菌、培养和鉴定设备按GB4789.1执行，其他设备如下：

——冰箱：-10℃~-20℃;

——恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃;——均质器；

——电子天平：感量0.1g和0.001g；——显微镜：10倍～100倍（油镜）；

——微量可调移液器（0.1μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、100μL~1000μL）；——水浴锅；

——涡旋振荡器；

——混匀仪（振荡频率1,400r/min以上）；——台式离心机（离心转速2,000r/min）；

——高速台式离心机（离心转速12,000r/min以上）；

——聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）扩增仪；——核酸电泳仪；

——凝胶成像系统；

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——灭菌锅；——pH计；

——全自动生化鉴定系统；——菌落自动计数仪；

——微量核酸蛋白浓度测定仪；

——基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（选做）。

4.2材料

除微生物实验室常规材料外，其他材料如下:——灭菌离心管（1.5mL、2mL）；

——灭菌吸头（10μL、200μL、1mL）；——灭菌PCR扩增反应管；

——无菌锥形瓶：100mL、500mL；

——无菌平皿：直径90mm；

——无菌试管：18mm×180mm；

——载玻片、盖玻片、油镜相关油擦镜纸、染色试剂；——L型涂布棒；

——API鉴定试剂条。

5培养基和试剂

5.1实验用水

培养基配制应符合GB4789.2