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《仪器分析实验》分子荧光分析法MolecularFluorimetryForshort:M-F西北大学基础化学实验
一、分子荧光分析法简介(对光的吸收)西北大学基础化学实验
1.1荧光的产生激发态能量的跃迁与转化的形式和速率：发生激发态反应A1,A2吸收:10-15sVR振动松弛：?10-12sic内转化：?10-11sisc系间窜越：10-6~10-2sF荧光：10-9~10-6sP磷光：10-6~10s0分子内的激发和衰变过程西北大学基础化学实验
1.2荧光光谱任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。发射光谱激发光谱组成、结构与衍化信息☆物质的化学结构☆环境与介质条件☆与其它溶质的相互作用☆反应动力学西北大学基础化学实验
西北大学基础化学实验
1.3荧光定量F=KIφC0fI0：光源强度；φ：荧光量子产率；fC：荧光体浓度）?（☆注意：在一定浓度范围内适用）问题：1）影响相对荧光强度的因素有哪些？2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。西北大学基础化学实验
1.4荧光仪的基本构造？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置上有什么不同？为什么？西北大学基础化学实验
1.5分子荧光分析法的应用简介★常规分析应用：☆定性分析：φ；λ；λ；峰形等fexem☆定量检测：F=KIφC0☆其它（略）f★高端生化研究：☆分子相互作用研究；☆代谢动力学跟踪；☆显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）西北大学基础化学实验
二、维生素B6注射液中维生素B6含的荧光法测定2.1实验原理★在近中性的水溶液中有较强的荧光发射:（323nm/392nm附近）★在碱性介质中不稳定VB的化学结构★易发生光降解6西北大学基础化学实验
2.2实验流程１、试液配制２、VB的荧光光谱的绘制6３、标准工作曲线的制作４、未知液的配制西北大学基础化学实验
2.3注意事项：☆注射液的移取与稀释☆系列标液的测定顺序☆即放即测，防光降解☆荧光仪的开关机顺序西北大学基础化学实验
2.4数据处理1.从荧光光谱图上读出最大激发（λ）和发射波长（λ）emex2.用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度3.计算注射液中维生素B的含量，病计算测定量占64.标示量的百分数西北大学基础化学实验
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