流式细胞分析课件.ppt

流式细胞分析*流式细胞分析*流式细胞分析*Fluorescein(FITC)400nm600nm700nmWavelength500nmExcitationEmission流式细胞分析*Phycoerythrin(PE)400nm600nm700nmWavelengthExcitationEmission500nmFluorescentDyes流式细胞分析*EthidiumPEcis-ParinaricacidTexasRedPE-TRConj.PIFITC600nm300nm500nm700nm400nm457350514610632488CommonLaserLines流式细胞分析*流式细胞分析*对单克隆抗体进行荧光染色，通过分析细胞表面抗原标记确认细胞类型。在细胞的混合群体中，我们使用不同的荧光染料区分细胞亚群。每个亚群的染色模式与FSC和SSC数据相结合，用于识别样本中的细胞种类，并可以得到各细胞亚群的百分含量。而且，还可以对感兴趣的细胞进行再分选。流式细胞分析*FluorescenceFALSSensorFluorescencedetector流式细胞分析*PMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBandpassFiltersExampleChannelLayoutforLaser-basedFlowCytometryLaser1234Flowcell流式细胞分析*台式机通常配有两根激光器：第一根激光器波长为488nm。第二根为波长635nm的红二极管固态激光器。流式细胞分析*数据分析

流式细胞分析*ImmunophenotypingCD2CD4流式细胞分析*设门通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据FSC或细胞大小，在FSC，SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。流式细胞分析*流式细胞分析*直方图可直观单个参数的细胞数量。阴性对照用于决定直方图中单参数的左右边界。左图中M1为阴性对照峰。右图中M2为CD3FITC阳性峰。流式细胞分析*****流式细胞分析*流式细胞术流式细胞分析*

流式细胞仪（Flow?Cytometer?简称FCM）是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的、快速的定量分析和分选的技术。从开始设想到第一台仪器的问世,科技工作者进行了不懈的努力。随着各相关技术的迅速发展，FCM技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的工具。

流式细胞分析*FCM仪器分为二大类：一类为台式机，其特点为：仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握。BD公司的临床型?FACScan也是最早可用于临床诊断的仪器。另一类为大型机，其特点为可快速将所感兴趣的细胞分选出来，并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上，同时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学研究应用。流式细胞分析*●流式细胞仪实物BDFACSVantageBD-Calibur流式细胞分析*其特点是：①测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞；②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；③是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果；④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。流式细胞分析*概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采集和分析技术等。FCM目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。流式细胞分析*流式细胞仪发展的历史起源:1934年---细胞计数仪雏形:1949年---Coulter计数器1959年---B型Coulter计数器1972年:BD(Becton-Dickinson)第一台流式细胞仪,具有分选功能流式细胞分析*流式细胞仪主要由三部分组成：流动室和液流系统；光路系统以及电