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双氢青蒿素抗疟机制

据2018年WHO发布的《世界疟疾报告》估计,2017年全世界共发生2.19亿

例疟疾,全球有43.5万人死于疟疾,而2016年全球共有2.16亿疟疾病例,约44.5

万人死于疟疾,消除疟疾仍然是一个严峻挑战。目前发现有五种疟原虫会使人类

感染疟疾,包括恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、三日疟原虫(Plasmodium

malariae)、卵形疟原虫(Plasmodiumovale)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)

及诺氏疟原虫(Plasmodiumknowlesi)。

其中恶性疟原虫引发的疟疾危害最大,死亡率最高。据2018年《世界疟疾报

告》,恶性疟原虫是撒哈拉以南非洲最流行的疟疾寄生虫,占2017年估计疟疾病

例总数的92%。

以青蒿素为基础的联合疗法是疟疾治疗的主要方法。青蒿素及其衍生物在疟

疾治疗上挽救了全球数百万人的生命,但是其抗疟机制仍有待于进一步阐明。

对青蒿素抗疟机制的研究不仅有助于青蒿素及其衍生物的合理利用,也有利

于基于机制协同的联合应用,降低青蒿素类化合物的耐药问题,同时也会促进类

似机制抗疟新药的筛选和研发。众所周知,青蒿素类化合物的激活主要依赖于血

红素或者亚铁,产生活性氧及其他自由基。

近几年,在肿瘤学研究中发现,青蒿素及其衍生物能诱导肿瘤细胞铁死亡

(ferroptosis),青蒿素及其衍生物是铁死亡的诱导剂;但是,其抗疟机制中是否

有铁死亡的参与,尚未见报导。铁死亡是近年新发现的一种调节性细胞死亡模式,

在形态学、基因学、生物化学特征方面与传统凋亡、坏死、自噬等死亡模式存在

显著差异,本质表现为Fe2+依赖的脂质过氧化物超限蓄积导致的细胞质膜损伤。

由于疟原虫与肿瘤细胞等在生物学上明显不同,铁死亡是否为恶性疟原虫的

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一种死亡方式,青蒿素类药物是否诱导恶性疟原虫铁死亡,哪些环节是主要靶点,

均值得论证和探讨。目的研究铁死亡是否为恶性疟原虫死亡的一种方式,铁死亡

是否是双氢青蒿素抗疟机制中的一个重要通路,并探索其深层机制。

方法通过恶性疟原虫体外抑制实验,研究铁死亡诱导剂(erastin(ERA)、RSL3、

索拉菲尼(SOR))和抑制剂(liproxstatin-1,去铁胺(DFO))对恶性疟原虫增殖的

影响,双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与铁死亡诱导剂和抑制剂联用对恶

性疟原虫增殖的影响,其中重点考察了双氢青蒿素与铁死亡抑制剂

(liproxstatin-1,Lip-1)联用对恶性疟原虫增殖的影响。用流式细胞术检测铁死

亡两个关键指标即细胞内动态铁池和膜脂质过氧化物,考察双氢青蒿素、铁死亡

诱导剂作用于恶性疟原虫后,对细胞内动态铁池和膜脂质过氧化物的影响,以及

双氢青蒿素与铁死亡抑制剂(liproxstatin-1,去铁胺)共同作用于恶性疟原虫后,

对细胞内动态铁池和膜脂质过氧化物的影响。

由于铁死亡最终导致Fe2+依赖的膜脂质过氧化物的增多,涉及到两个方面:

一是亚铁浓度升高的原因,二是膜脂质过氧化。用脂质组学技术,分析不同剂量的

双氢青蒿素作用后质膜系统中脂质的变化,研究膜脂质过氧化物增多的分子水平

的机制。

用RT-PCR技术,分析不同剂量的双氢青蒿素作用于恶性疟原虫后,疟原虫铁

硫簇蛋白和铁硫簇装配通路等相关基因的表达水平变化,研究亚铁水平升高的深

层原因。结果1、铁死亡诱导剂可剂量依赖