DB34T 3191-2018 饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法　　.docxVIP

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DB34

安徽省地方标准DB34/T3191—2018

饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定高效液相色谱法

DeterminationofTiamulinFumarateinfeedHighperformanceliquidchromatographymethod

2018-08-08发布2018-09-08实施

安徽省质量技术监督局发布

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DB34/T3191—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、宁国市金鼎家庭农场、宁国市金东坊农业开展有限公司、合肥市动物卫生监督所、阜阳市动物卫生监督所、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省水产技术推广总站。

本标准起草人：吴昊、刘发全、李东风、宋亚伟、吴兵、方芳、郭恒心、徐月清、龙中原、胡群芳、张利亚、郑新勇、钱昌银、程扬、郑举、潘孝成、孙德祥、何为俊、王群、汪百才、石翠芳。

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DB34/T3191—2018

饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定的高效液相色谱法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定。本标准定量限为1.0mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样

3原理

试样中的延胡索酸泰妙菌素经甲醇溶液超声提取，过滤后经色谱柱分离，用高效液相紫外检测器检测，外标法定量。

4试剂和材料

除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T6682中一级用水的规定。4.1甲醇：色谱纯。

4.2乙腈：色谱纯。4.3碳酸铵。

4.4高氯酸。

4.5高氯酸水溶液：取高氯酸8.5mL，加水至100mL。

4.6碳酸铵缓冲液溶液：取碳酸铵10g，加水800mL使溶解，加高氯酸水溶液（4.6）24mL，加水至1000mL。

4.7流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比49∶28∶23（V/V/V）。4.8延胡索酸泰妙菌素标准品：纯度≥98.0％。

4.9延胡索酸泰妙菌素标准溶液的制备

4.9.1延胡索酸泰妙菌素标准溶液贮备液：精确称取20mg延胡索酸泰妙菌素标准品(精确至0.01mg)于200mL容量瓶中，用流动相（4.8）超声溶解，冷却，此溶液浓度为100μg/mL。置于4℃冰箱中保存，有效期60天。

4.9.2延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液：分别吸取贮备液（4.10.1）1mL、2mL、5mL、10mL、20mL于100mL容量瓶中，用流动相溶液（4.8）定容，标准工作溶液系列浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。

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DB34/T3191—2018

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）。5.2分析天平：感量0.1mg、0.01mg。

5.3离心机：≥3000r/min。5.4超声波仪。

5.5分析筛：孔径0.42mm。5.6粉碎机。

5.7微孔滤膜：孔径0.45μm尼龙滤膜。

6试样的制备

按GB/T14699.1的规定采样，选取饲料样品500g以上，四分法缩减至100g,磨碎，全部通过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。

7分析步骤

7.1提取

7.1.1称取试样适量（配合饲料5.0g、浓缩饲料3.0g、预混合饲料1.0g），精确至0.001g，置于

50mL容量瓶中，用甲醇溶液（4.2）准确定容，置于超声波仪（5.4）超声提取30min。

7.1.2将试样提取液（7.1.1）转移至离心管，3000r/min，离心10min，取离心上清液用0.45μm尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。

7.2测定

7.2.1高效液相色谱条件

——色谱柱：C18型柱，长250mm，内径4.6mm，粒径