海洋生物体中金刚烷胺的测定　液相色谱-串联质谱法.docx

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海洋生物体中金刚烷胺的测定液相色谱-串联质谱法

警告：实验中使用的标准溶液、有机溶剂等均具有一定的毒性和挥发性，实验人员应避免与其直接接触，样品前处理过程应在通风橱中进行。

范围

本文件描述了海洋生物体中金刚烷胺液的液相色谱-串联质谱测定方法，包括原理、试剂及配制、仪器和设备、样品、分析步骤、结果计算与表示、准确度、质量控制和质量保证、废物处置等。

本文件适用于海洋生物体鱼、虾、海参、海带和贝类中金刚烷胺的测定。当称样量为3.00?g时，金刚烷胺检出限为0.5?μg/kg，测定下限为1.0?μg/kg。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

原理

海洋生物体样品用1%乙酸乙腈提取后，经固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

试剂及配制

实验室用水：GB/T6682，一级。

甲醇（CH3OH）：色谱纯。

甲酸（HCOOH）：色谱纯。

乙腈（CH3CN）：色谱纯。

氨水（NH4OH）：优级纯。

乙酸（CH3COOH）：优级纯。

1%乙酸乙腈溶液（体积分数）。

取1?mL乙酸，用乙腈定容至100?mL。

5%氨水甲醇溶液（体积分数）。

取5?mL氨水，用甲醇定容至100?mL。

0.1%甲酸溶液（体积分数）。

取0.10?mL甲酸，用水定容至100?mL。

0.1%甲酸乙腈定容液（体积分数）。

将1?mL甲酸与300?mL乙腈，加入到700?mL水中。

金刚烷胺标准品：CAS号768-94-5，纯度大于99.0%。

D15-金刚烷胺内标溶液：CAS号33830-10-3，1?mg/mL。

金刚烷胺标准贮备液。

称取金刚烷胺0.010?0?g，用乙腈溶解，并定容至10?mL，配制成1.0?mg/mL标准贮备液，-20?℃下避光保存，有效期为90?d。

金刚烷胺标准工作液。

移取100μL金刚烷胺标准贮备液（5.13），用乙腈溶解，并定容至100?mL，配制成1.0?μg/mL标准工作液，4?℃下避光保存，有效期为30?d。

D15-金刚烷胺内标标准中间液。

移取100?μLD15-金刚烷胺内标溶液（5.12），用乙腈溶解，并定容至100?mL，配制成1.0?μg/mL内标标准中间液，4?℃下避光保存，有效期为30?d。

D15-金刚烷胺内标标准工作液。

移取1?mLD15-金刚烷胺内标标准中间液（5.15），用乙腈定容至10?mL，配制成100?μg/L内标标准工作液，4?℃下避光保存，有效期为7?d。

仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源（ESI源）。

天平：感量分别为0.01?g和0.000?1?g。

均质机。

高速离心机：10?000?r/min。

超声波清洗器。

涡旋混合器。

固相萃取装置。

固相萃取柱：MCX（混合型阳离子固相萃取柱），60?mg/3?mL，或相当者。

氮吹仪。

聚丙烯离心管：50?mL。

滤膜：聚偏氟乙烯滤膜，孔径为0.22?μm。

样品

制备

鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉，将鳞、皮单独收集；虾，去头、去壳、去肠腺，取肌肉部分；海参、海带、贝等取可食部分，样品充分搅碎、混匀。如不能及时检测，-18?℃以下冷冻保存备用。取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

提取

称取3.00（±0.01）g样品至50?mL离心管中，加入100?μL内标标准工作液（5.16）和15?mL1%乙酸乙腈溶液（5.7），涡旋30?s，超声提取15?min，8?000?r/min离心10?min，待净化。

净化

MCX固相萃取柱经6?mL甲醇（5.2）和6?mL水（5.1）活化后，取5?mL上清液移入固相萃取柱，3?mL水（5.1）淋洗，6?mL5%氨水甲醇溶液（5.8）洗脱，全程控制流速为2?mL/min～3?mL/min。收集洗脱液，用氮吹仪于40?℃下吹至近干，用定容液（5.10）定容至1?mL，过滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析。

空白试样的制备

除不加试料外，均按上述测定步骤进行。

分析步骤

液相色谱质谱条件

液相色谱条件：

色谱柱：C18（100?mm×2.1?mm，1.8?μm），或相当者；

色谱柱温度：40?℃；

流速：0.25?mL/min；

进样量：10?μL；

流动相：A为乙腈（5.4）；B为0.1%甲酸溶液（5.9）；流动相梯度洗脱程序见表1。

流动相梯度洗脱程序表

时间

min

流速

mL/min

流动相A

%

流动相B

%

0.00

0.25

5

95

0.