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第2章细胞工程

第2节动物细胞工程

一、动物细胞培养

1.概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。

2.原理：细胞增殖

3.地位：动物细胞工程的基础

4.关键操作：原代培养和传代培养。

（一）动物细胞培养的条件

1.营养

（1）成分

①已知成分

将细胞所需的营养物质（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按其种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。

②未知成分

使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分。

（2）培养基的物理性质

培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。

2.无菌、无毒的环境

①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；②在无菌环境下进行操作；③还需要定期更换培养液。

3.温度、pH和渗透压

（1）适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5℃为宜。

（2）适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。

（3）适宜的渗透压：维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。

4.气体环境

（1）组成：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。

（2）气体作用：①O2：O2是细胞代谢所必需的；②CO2：CO2的主要作用维持培养液的pH。

（二）动物细胞培养的过程

①原代培养：将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。

②传代培养：将分瓶后的细胞培养称为传代培养；

③细胞贴壁：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁；

④接触抑制：当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。

1.取动物组织

（1）取材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。

（2）取材原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。

2.制成细胞悬液

（1）制成细胞悬液的步骤：①将组织分散成单个细胞；②用培养液将细胞制成细胞悬液。

（2）将组织分散成单个细胞的原因：①从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖；②能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。

（3）将组织分散成单个细胞的方法：①机械法；②用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。

3.原代培养

将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内。

4.分瓶、传代培养

悬浮生长类：直接用离心法收集；贴壁生长类：重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集；将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。

5.植物组织培养与动物细胞培养的比较

比较项目

植物组织培养

动物细胞培养

理论基础

植物细胞全能性

细胞增殖

区

别

培养基

类型

固体或半固体培养基

液体培养基

成分

水、矿质元素、维生素、植物激素、蔗糖、氨基酸、琼脂等

葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、动物血清等

取材

离体植物器官、组织、细胞

动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织

关键环节

细胞的脱分化和再分化

细胞增殖和癌变

结果

新的组织或植株个体，可以体现全能性

新的细胞系或细胞株，不形成个体，不体现全能性

应用

①植株快速繁殖；②脱毒植株的培育；③人工种子；④生产药物、杀虫剂等；⑤转基因植物的培育

①蛋白质生物制品的生产；②皮肤移植材料的培育；③检测有毒物质；④生理、病理、药理等方面的研究

相同点

①两种技术手段培养过程中细胞都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称克隆，都不涉及减数分裂；②均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件

（三）干细胞培养及其应用

1.分布

干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中。

2.分类

干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞等。

（1）胚胎干细胞（简称ES细胞）

①分布：存在于早期胚胎中。

②特点：具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。

（2）成体干细胞

①分布：存在于成体组织或器官内中。

②类别：包括骨髓中的造血干细胞、神经系统中的神经干细胞、睾丸中的精原干细胞等。

③特点：一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。

3.干细胞的应用

（1）原理：干细胞有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、器官的发育、再生和修复等密切相关。

（2）应用：

造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病。

神经干细胞：治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）。

诱导多能干细胞（iPS细胞）：可治疗小鼠的镰状细胞贫血症，在治疗阿尔兹海默病、心血管疾病等领域。

二、动物细胞融合与单克隆抗体技术

（一）动物细胞融合技术

1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。

2.结果：形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞