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动物细胞培养用“胰蛋白酶”还是“胶原蛋白酶”

人教版高中生物学《选择性必修3·生物技术与工程》，对于

细胞培养提到用“胰蛋白酶”、“胶原蛋白酶”处理，但没有说明二者

区别并辨析相关原因。

从学生对相关问题的作答情况来看，不清楚“胰蛋白酶”和“胶

原蛋白酶”的作用特点及情况。

那么，“胰蛋白酶”和“胶原蛋白酶”有什么区别？

尽管胰蛋白酶和胶原蛋白酶都是细胞培养中常用于将体积较小

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的组织块分散成细胞团或单细胞的消化液，但它们的作用机制及适用

情况并不相同。

1.胰蛋白酶和胶原蛋白酶的作用特点

1.1胰蛋白酶的作用特点

胰蛋白酶分离自牛、猪等动物的胰，作用于与赖氨酸或精氨酸相

连接的肽链，除去细胞间黏蛋白及糖蛋白，从而使细胞分离，是应用

广泛的消化物，适于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎组织、羊膜、

上皮组织、肝、肾等软组织以及传代细胞等。胰蛋白酶的消化作用与

酶的浓度、pH、温度、组织块的大小以及组织的硬度都有关系。胰蛋

白酶浓度过大或消化时间太长，会导致细胞被消化；但反之消化不充

分也达不到分散细胞的目的。此外，血清明显抑制胰蛋白酶的活性，

2+2+

Ca和Mg对胰蛋白酶的活性有一定抑制作用。

1.2胶原蛋白酶的作用特点

胶原蛋白酶是能在一定的pH和温度下切割胶原蛋白主体螺旋

多肽链的酶类，主要用于水解结缔组织中的胶原蛋白，适于消化纤维

性组织、上皮组织以及癌组织等。当拟消化的组织较硬，内含较多的

结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞效果较差，可采用胶原

酶解离细胞法。钙、镁离子以及血清不会影响胶原酶的消化作用，其

消化作用缓和，且无需机械振荡（表1）。

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与胰蛋白酶不同的是许多动物的组织细胞和微生物都是它的来

源，其中细菌是微生物胶原蛋白的主要来源，已发现40多种。目前

商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为4种类

型：

（1）胶原酶Ⅰ型：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、

酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性），通常用作上皮细胞、肝、

肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备。

（2）胶原酶Ⅱ型：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、

骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备。

（3）胶原酶Ⅲ型：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的

制备。

（4）胶原酶Ⅳ型：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，

或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

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2.两种蛋白酶在细胞培养中的应用

2.1原代培养

原代培养是从供体获取组织或细胞进行的首次培养，也叫初代培

养。由于取得的组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生较大变化，

具有二倍体遗传性状，在供体来源充分、条件稳定的情况下（年龄、

性别），能在一定程度上反映体内状态。原代培养的组织通常由多种

细胞成分组成，较为复杂，即使培养较纯的单一类型的细胞，如上皮

或成纤维细胞，也仍然存在着异质性。正因如此，胰蛋白酶和胶原酶

均可在