细菌的感染与致病性.ppt

2.基因工程载体必须具备下列条件：1）环状DNA结构2）具有限制性内切酶的位点，以便与外源基因连接3）可不依赖于染色体进行独立复制4）具有有别于宿主的选择性标记5）可通过特定方法导入某些宿主细胞第31页,共61页，星期六，2024年，5月功能不同特殊用途的载体克隆载体表达载体拷贝数高具有单（多）克隆位点载体本身带有一个或多个选择标记除具有克隆载体的一般特性以外，还具有一套表达元件：启动子、SD序列、终止子3.基因工程载体分类第32页,共61页，星期六，2024年，5月4、质粒作为载体

AATTCTTAAGGAATTCTTAAEcoRI酶切转化第33页,共61页，星期六，2024年，5月1、高温变性2、低温复性3、一定温度延伸PCR第34页,共61页，星期六，2024年，5月三、转座因子存在于细菌染色体上，可作为独立单位在染色体上自由移动的DNA片断。转座因子有三种类型：插入序列（IS）、转座子（Tn）、及特殊噬菌体。第35页,共61页，星期六，2024年，5月1.插入序列（insertionsequence,IS）是最小的转位因子，长度不超过2kb，不携带任何已知与插入功能无关的基因区域，往往是插入后与插入点附近的序列共同起作用，可能是原细胞正常代谢的调节开关之一。TransposaseABCDEFGGFEDCBAISIS第36页,共61页，星期六，2024年，5月2.转座子（transposon,Tn）长度一般超过2kb，除携带与转位有关的基因外，还携带耐药性基因、抗金属基因、毒素基因及其他结构基因等。因此当Tn插入某一基因时，一方面可引起插入基因失活产生基因突变，另一方面可因带入耐药性基因而使细菌获得耐药性。转座子可能与细菌的多重耐药性有关。ISISResistanceGene(s)ISISResistanceGene(s)第37页,共61页，星期六，2024年，5月转座子的特征转座子携带耐药或毒素基因Tn1Tn2Tn3AP（氨苄青霉素）Tn4AP、SM（链霉素）、Su（磺胺）Tn5Km（卡那霉素）Tn6KmTn7TMP（甲氧苄氨嘧啶）、SMTn9Cm（氯霉素）Tn10Tc（四环素）tn551Em（红霉素）Tn971EmTn1681大肠埃希菌（肠毒素基因）第38页,共61页，星期六，2024年，5月3.转座噬菌体或前噬菌体是一些具有转座功能的溶原性噬菌体，当整合到细菌染色体上，能改变溶原性细菌的某些生物学性状，如白喉棒状杆菌、肉毒梭菌等的外毒素就是由转座噬菌体的有关基因所编码的。另外，转座噬菌体从细菌染色体分离脱落时，可能连带有细菌的DNA片段，故它还可能在遗传物质转移过程中起载体作用。第39页,共61页，星期六，2024年，5月四、毒力岛（PAI）位于细菌染色体之内，分子结构与功能有别于细菌染色体的病原菌的某个或某些独立基因群。第二节基因突变一、细菌变异类型第40页,共61页，星期六，2024年，5月1.形态变异（1）自然形成或诱导产生的细菌L型。（2）病原菌在特定的动物组织器官中，可发生形态结构变异2.结构和抗原性变异。（1）荚膜变异。（2）芽孢变异。（3)鞭毛变异。H-O变异：有鞭毛能运动的细菌丧失鞭毛形成能力的变异称3.培养性状的变异S-R变异；R-S变异4.毒力变异5.生化形状变异（1）营养缺陷型变异（2）诱导酶产生。（3）终末产物阻遏。6.耐药性变异第41页,共61页，星期六，2024年，5月形态结构变异3-6%食盐

鼠疫杆菌────→多形态性(衰残型)。

????????琼脂培养基

第42页,共61页，星期六，2024年，5月形态结构变异青霉素、溶菌酶

正常形态细菌──────→L型变异抗体或补体(部分或完全失去胞壁)

正常霍乱弧菌霍乱弧菌L型第43页,共61页，星期六，2024年，5月毒力变异β棒状噬菌体

白喉棒状杆菌────→获得白喉毒素第44页,共61页，星期六，20