细胞生物学研究方法专题座.pptVIP

五、分子杂交技术具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否具有互补关系。（一）原位杂交（insituhybridization）。用于检测染色体上的特殊DNA序列。最初是使用带放射性的DNA探针，后来又发明了免疫探针法。第96页,共103页，星期六，2024年，5月原位杂交技术第97页,共103页，星期六，2024年，5月（二）Southern杂交是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，则称为Northern杂交。第98页,共103页，星期六，2024年，5月六、PCR技术PCR即：polymerasechainreaction。反应体系：①样品DNA；②引物（primer），约15-20个核苷酸；③4种dNTP；④TagDNA聚合酶，来自于嗜热水生菌Thermusaquaticus，最适作用温度75~80℃，短时间在95℃下不失活。⑤缓冲体系和Mg2+。反应过程：①变性：约90-95℃；②复性：约60℃左右；③延