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生防链霉菌gCLA4遗传转化体系的建立与优化

徐萌萌;张红;何姣;涂璇;颜霞;黄丽丽

【摘要】[目的]建立生防菌淡紫灰链霉菌(Streptomyces

lavendularectus)gCLA4的遗传转化体系,为定向改造基因、提高基因表达水平及

其生防分子机制研究奠定基础.[方法]以具有安普霉素(Apramycin)抗性基因标记的

整合型质粒pSET152为出发质粒,EscherichiacoliET12567(pUZ8002,pSET152)

为供体,淡紫灰链霉菌gCLA4为受体进行接合转移试验,并对影响接合效率的培养

基、热激温度、接合转移时间和筛选转化子培养基等因素进行优化.[结果]成功地将

质粒pSET152转入到了生防链霉菌gCLA4中,明确了可用于筛选链霉菌gCLA4

转化子的抗生素为安普霉素或四环素;链霉菌gCLA4孢子50℃热激时转化效率较

高,接合效率在16,18,20h下没有明显差异,MS培养基作为接合转移培养基时转化

效率最高,接合产物涂布到高氏一号抗性培养基上进行阳性转化子筛选的效果最

好.[结论]建立了生防链霉菌gCLA4的遗传转化优化体系.

【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》

【年(卷),期】2016(044)010

【总页数】5页(P121-125)

【关键词】生防链霉菌gCLA4菌株;接合转移;遗传转化;质粒pSET152

【作者】徐萌萌;张红;何姣;涂璇;颜霞;黄丽丽

【作者单位】西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生

物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;西北农林科技大学理学院,陕西杨凌

712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;西北农林科技大

学生命科学学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌

712100;三峡大学生物与制药学院,湖北宜昌443002;西北农林科技大学生命科学

学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;西

北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实

验室,陕西杨凌712100

【正文语种】中文

【中图分类】Q933

淡紫灰链霉菌gCLA4(Streptomyceslavendularectus,GenBank登录号为

EF469608,菌种保藏号为GCMCC2131)是旱区作物逆境生物学国家重点实验室分

离自黄瓜叶片的一株拮抗菌，该菌株及其发酵液对番茄早疫病菌(Alternaria

solani)、辣椒疫霉病菌(Phytophthoracapsici)、油菜菌核病菌(Sclerotinia

sclerotiotum)、苹果树腐烂病菌(Valsamali)等多种重要的植物病原菌均有很强的

抑制作用，有良好的生防应用潜力[1]。目前对生防链霉菌gCLA4的研究仅限于对

其发酵条件的优化及活性物质的初步研究[2]等方面，对其生防机理的分子机制涉

及不多。旱区作物逆境生物学国家重点实验室已经对生防链霉菌gCLA4进行了全

基因组测序，为了进一步对其中一些功能基因进行研究，建立简单、高效的

gCLA4遗传转化体系就显得非常必要[3]。

链霉菌中常用的导入外源遗传物质的方法有PEG介导的原生质体转化法、接合转

移法和电穿孔法。但不同的菌株因其特性不同，转化方法差别也很大[4]。自从

Mazodier等[5]通过接合转移法成功将质粒由大肠杆菌转入变铅青链霉菌后，接

合转移法作为一种非常有效的链霉菌基因转移方法，近年来得到了广泛应用，如福

司曲星(Fostriecin)产生菌(Streptomycespulveraces)[6]、武夷菌素产生菌不吸

水链霉菌(Strepomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)[7]和Xinaomycins产生

菌诺尔斯链霉菌(Streptomycesnoursei)[8]等链霉菌遗传转化系统的构建，淀粉

酶产色链霉菌(Streptomycesdiastatochromogenes)1628接合转移体系的构建

[9]，谷氨酰胺转氨酶产生菌(Streptomycesmobaraensis)属间接合转移体系的构

建[10]等。pSET152是一