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细胞培养基和发酵液中氨基酸的检测

摘要：本文建立了一种采用离子色谱法，积分脉冲安培检测器测定细胞培养基和发酵液中的

氨基酸的方法。选择的色谱条件为：采用AminoPacPA10分析柱和AminoPacPA10保护柱，

水、醋酸钠和氢氧化钠缓冲溶液梯度淋洗，积分脉冲安培检测。该方法检测限（S/N=3）为

0.8-4.0μg/g，氨基酸在100mM（1.0nmol）以内都有线性，RSD0.15–0.69%，可用于具体

样品的检测。

关键词：离子色谱；氨基酸；AminoPacPA10

大多数氨基酸具有弱发光基团，需在高浓度时才可用紫外吸收检测。发酵液或细胞培养

基中的许多成分也具有发色团，用吸收法检测时它们的吸收会干扰氨基酸的直接检测。氨基

酸、糖类、乙二醇、乙醇、胺、含硫化合物都能够发生氧化反应，因此，可以用安培法直接

检测这类物质。安培检测法对在特定电压下发生氧化反应的分析物具有专一性，同时在此电

压下，其它所有化合物都不能被检测。积分脉冲安培法检测（IPAD）是一种强大的检测技

术，它有很宽的线性范围和很低的检测限。AAA-Direct.将阴离子交换（AE）和IPAD两种

方法结合起来。AminoPacPA10是一种高效阴离子交换柱，用它可以分离所有常见氨基酸。

对同时含有糖和氨基酸的成分复杂的样品，如细胞培养基和发酵液，利用AAA-Direct可以

同时检测其中的糖、乙二醇、糖醇（醛醇）和氨基酸，而基本不受其他成分的干扰。虽然基

于柱前和柱后衍生的氨基酸分析方法在评价样品中氨基酸的含量方面有广泛应用，但是这些

方法运行费用高，且不能同时分析糖和氨基酸。AAA-Direct仅使用一种色谱方法，样品直

接进样，就可实现细胞培养基和发酵液中所有常见氨基酸的同时检测。

酵母和细菌发酵液样品中同时存在糖、糖醇、乙醇、乙二醇成分的情况下，应用

AAA-Direct分析其中的常见氨基酸。酵母提取物－蛋白胨－葡萄糖培养液（YPD）和LB

培养液是培养真核和原核细胞的常用培养基，无血清无蛋白杂交瘤细胞培养基、MEM和胎

牛血清常用于培养哺乳动物细胞或作为培养基的添加成分。这些培养基成分复杂，并且都含

有未知成分。因此，分析这种样品对大多数色谱方法都是一个巨大的挑战。YPD和LB培养

基中存在无机和有机阴离子成分以及糖类和醛醇；无机和有机阴离子成分可以用IonPac

AS11阴离子交换柱和抑制电导检测分析，糖类和醛醇也可以用CarboPacPA1和MA1柱分

析。在这篇应用注解中，使用AminoPacPA10阴离子交换柱来分离细胞培养基和发酵液中

的氨基酸和糖类。典型的细胞培养基和发酵液样品中都含有较高浓度的蔗糖（100mM）或

其它糖类作为碳源。高浓度糖类的存在可能会与氨基酸发生共洗脱从而影响氨基酸的检测。

糖和常见氨基酸是否可以同时检测取决于样品中糖的种类。这篇应用注解提供了一种新的方

法，能在常见糖类存在的情况下对氨基酸进行检测。

1实验部分

1.1仪器与试剂

DionexBioLC系统组成：GP50梯度泵，2mm微孔（选择在线脱气）；ED50电化学检

测器，pH／Ag／AgCl参比电极，AAA-Direct可抛弃金工作电极，AAA-Direct普通金工作

电极；AS50自动进样器；AS50TC柱温箱；Chromeleon色谱工作站。

NaOH，50%(w/w)（FisherScientificandJ.T.Baker）；电阻率为18MΩcm的去离子水；

无水NaAc(AAA-DirectCertified,DionexCorp.,P/N059326);N-乙酰-D-葡萄糖胺、无水D-树

胶醛糖、无水D-纤维二糖、龙胆二糖、n-辛基-.-D-吡喃葡萄糖、葡萄糖醛酸、α－水合乳

糖、乳果糖、来苏糖、麦芽六糖、麦芽四糖、甘露糖胺、甘露糖、蜜二糖、亚硫酸钠、β-D-S-

葡萄糖、松二糖、尿素、无水D-木糖、Palatinose、山梨糖、肌醇、均购自SigmaChemicalCo.；

甘露醇，ACS级(J.T.BakerIncorporated)；山梨醇(EastmanChemicalCo.)；Sucralose(McNeil

Nutritionals,Inc.)；蔗糖(FisherScientific)；丙三醇(EMScience)；甲醇(F