结核病的实验室诊断技术及应用.ppt

*而且，针对涂片等方法不能区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌导致误检的问题，TB-SAT可以区分结核分枝杆菌和至少18种非结核分枝杆菌。**中国防痨协会的知名结核病诊断专家也指出，TB-SAT可以显著提高结核分枝杆菌的阳性检出率，对于早期发现传染性肺结核患者，控制结核病传染源有极其重要的意义。****多数研究报告提示：耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关。总体上是基因一个或几个核苷酸突变（表现增加、缺失、替代），造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列，影响药物与靶位酶结合产生耐药。**采用PCR+反向点杂交技术，通有带有生物素的特异性引物与样品DNA进行扩增，之后再与膜条上的探针进行分子杂交，最后显色，肉眼就能对分枝杆菌菌株的鉴定*DNA用于临床检验的不足“死菌检测呈阳性”，与临床相关性差不能区分“潜伏感染”“活动性感染”易交叉污染反应易受抑制第31页,共54页，星期六，2024年，5月NASBA（国外）TMA（国外）SAT（国内）四、常见的RNA检测技术第32页,共54页，星期六，2024年，5月SAT技术是将核酸恒温扩增和实时荧光检测相结合的一种新型RNA检测技术。TB—SAT检测技术第33页,共54页，星期六，2024年，5月TB-RNA释放恒温扩增实时检测超声波（300W）15min痰液预处理42℃40min与反应液混合60℃10min42℃5minTB-SAT操作流程50μl稀释液全程2小时，会做PCR，就学的会SAT第34页,共54页，星期六，2024年，5月TB-SAT检测技术优点第35页,共54页，星期六，2024年，5月RNA诊断技术的优势灵敏度高：RNA≥DNA拷贝数与临床相关性好：区分“死活菌”：减少抗生素滥用可以诊断“活动性感染”：活动性感染：RNA转录活跃潜伏感染：RNA不转录不易污染：靶标和扩增产物都是RNA第36页,共54页，星期六，2024年，5月TB-SAT检测区分MTB和NTM结核分枝杆菌复合群（MTB）：人型结核分枝杆菌牛型结核分枝杆菌非洲型结核分枝杆菌非结核分枝杆菌（NTM）：研究表明，TB-SAT可以区分如下NTM：堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、海分枝杆菌等18种NovelReal-TimeSimultaneousAmplificationandTestingMethodToAccuratelyandRapidlyDetectMycobacteriumtuberculosisComplexJ.Clin.Microbiol.2012,50(3):646.DOL:10.1128/JCM.05853-11.第37页,共54页，星期六，2024年，5月活菌检测技术，可用作肺结核治疗效果评估据文献报道：每个结核分枝杆菌含有约2000个拷贝rRNA研究表明：rRNA与结核分枝杆菌的生活力有着很好的相关性，rRNA可以反映结核分枝杆菌的死菌活菌状态研究表明：在用药治疗期内，随着结核分枝杆菌的死亡，rRNA大约在7天左右时间全部降解。而DNA含量几乎保持不变VIVIANJONAS,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Sept.1993,p.2410-2416CLAUDIOPIERSIMONI,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Jan.1997,p.193–196.GABRIELLEM.E.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.1994,p.1959-1965第38页,共54页，星期六，2024年，5月免疫法常有既往感染问题SAT更有利于治愈判断窗口期时间示意相对浓度示意抗体RNADNA病原体感染前后各检测靶标的含量变化死菌的RNA快速降解，有助治愈判断用药治疗DNA需要一段时间降解RNA快速降解第39页,共54页，星期六，2024年，5月相比DNA,RNA检测能更好的体现疗效服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天DNA和RNA的滴度变化，相比DNA,RNA与药物浓度变化的符合率更高，RNA检测能更好的进行疗效评估。GABRIELLEM.E.AssessmentofMycobacterialViabilitybyRNAAmplification.ANTIMICROBIALAGENTSAND