分子生物学课件第五章基因表达调控真核生物(共50张PPT).pptx

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分子生物学课件第五章基因表达调控真核生物;多细胞真核生物,遗传信息从细胞核的基因组DNA传递到基因编码的蛋白质均受到多层次的调控。;一、真核生物基因表达的特点;3.转录和翻译分开进行真核生物DNA在核中转录生成mRNA,穿过核膜至胞质指导蛋白质合成;转录和翻译不是同步进行的,受多层次调控。;5.不存在超基因式操纵子结构真核生物基因转录产物为单顺反子。;单顺反子(monocistron)

;;(一)基因组DNA水平的调控;2.基因扩增(geneamplification);3.基因重排(generearrangement)

;BCR-ABL融合基因形成示意图;4.基因的甲基化修饰

DNA上特定的CpG序列处的胞嘧啶发生甲基化修饰(5mC)。甲基化程度与基因的表达一般呈反比关系。甲基化程度愈高,基因的表达则降低。去甲基化,基因的表达增加。;DNA甲基化研究分析方法;5.染色质结构对基因表达的调控作用;1.转录起始复合物的形成

2.顺式作用元件(cis-actingelement)

3.反式作用因子(trans-actingfactor)

4.转录水平的调控机制;1.转录起始复合物的形成;2.顺式作用元件(cis-actingelement);(1)启动子(promoter);;(2)增强子(enhancer);(3)其他元件包括负调控元件和终止子等。;终止子;3.反式作用因子(trans-actingfactor);(1)反式作用因子根据作用方式分为三类:;(2)转录因子(transcriptionfactor,TF);(2)转录因子结构;TFⅢA结构域示意图;;DNA识别结合域:;同源结构域(homeodomain,HD);碱性-亮氨酸拉链;意义:保护转录体mRNA不受5ˊ外切酶降解,增强mRNA稳定性,有利于mRNA从细胞核向胞质转运,促进mRNA与核糖体结合(通过帽结合蛋白介导完成)。

初级转录产物要经过转录后加工修饰

原理:蛋白质结合到DNA序列上,可阻止核酸酶对其的降解。

二种样品竞争性杂交示意图

原理:蛋白质与特定的DNA序列结合后,迁移率会发生改变,DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。

形成闭合复合物,DNA双链没有打开,不能启动转录。

意义:在高等生物细胞的高度异质性中起重要作用。

B.折叠的Cys2/His2锌指结构;

(1)反式作用因子的活性调节

SEAP(分泌性碱性磷酸酶)

真核Ⅱ类基因的顺式作用元件图

基因重排(generearrangement)

TFⅢA结构域示意图

内含子选择:删除或部分删除内含子

核心序列为TATAAAA,功能:确定转录起始位点并产生基础水平的转录。

(3)足纹法(footprinting);①酸性α-螺旋(acidicα-helixdomain)能非特异性地与起始复合物(如TATA盒结合因子)相互作用发挥转录活化功能。;3.转录水平的调控机制;反式作用因子的激活方式:;(2)反式作用因子作用方式;③配体结合:(核受体超家族)

A.Cys2/His2锌指结构;

(heterogeneousnuclearRNA,hnRNA)

成虫:959个细胞

所含的至少二个α螺旋中形成“转折”,第三个α螺旋与DNA大沟相互作用,是同源盒蛋白与DNA结合的主要力量。

RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

每个元件长度约为7~20bp,是决定RNA聚合酶Ⅱ转录起始点和转录频率的关键元件。

(4)凝胶迁移率(gelshiftassay)

或电泳迁移率实验(EMSA)

(2)反式作用因子作用方式

TATA因子与TATA盒结合,形成稳定的转录复合物,介导RNA聚合酶Ⅱ分子转录。

TFⅢA结构域示意图

应用:研究DNA结合蛋白;

(3)其他元件包括负调控元件和终止子等。

(transcriptionalactivationdomain)

RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

(1)翻译起始因子调节蛋白质合成速度;(1)报道基因分析法;(2)DNaseⅠ超敏感分析法;(3)足纹法(footprinting);(4)凝胶迁移率(gelshiftassay)

或电泳迁移率实验(EMSA);(三)转录后水平的调控;3ˊ端加尾:转录后在mRNA在3ˊ末端加上50~150个腺苷酸,即poly(A)尾。;2.mRNA前体的选择性剪接(alternativesplicing)对基因表达的调控作用;高等真核细胞中,某个内含子

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