RNA提取及反转录 .pdfVIP

一、RNA提取

（1）实验材料准备

1.Trizol（全式金，4℃保存）

2.氯仿、异丙醇、无水乙醇（专门用于RNA提取，4℃）

3.75%的乙醇（RPE）：75%无水乙醇+25%DEPC水

4.DEPC水：999mL高压过的三蒸水中加入DEPC（焦碳酸二乙酯）原液1mL，摇匀过夜，4℃

保存。

5.无RNA酶的EP管及枪头（天净沙RNase清除剂购于恩硕公司，天净沙RNase清除剂和单

蒸水以1:1000比例泡5min，倒掉后，再以1:1000比例配比，浸泡过夜，倒掉，以1:10000比

例浸泡3-5min，尽量倒净，高压30min，放烘箱烘干。）

6.移液器、振荡器、高速离心机（最好为4℃离心机）、瞬时离心机、封口膜。

（2）实验步骤

组织样品研磨过程取新鲜采集或保存于-80℃或液氮中的组织200mg（黄豆样大小），放入

盛有1/5液氮的研钵中，先用研杵将组织块敲碎（注意不要让组织和液氮溅出），然后开始研

磨，及时补充液氮以防组织暴露于空气中，将组织研磨成无明显颗粒的粉末状后加入液氮，将

组织液氮混合液倒入预冷的EP管中待液氮挥发完组织还未融化时加入1mLTrizol（或在液氮

即将挥发完毕时，用不锈钢小勺将研磨好的组织加