吉林农业大学 动物微生物学课件35.ppt

****/31明德崇智厚朴笃行病毒与细胞的相互作用第一节病毒的细胞培养第二节病毒与细胞的相互作用培养病毒的载体病毒没有或有不完整的酶系统，无法合成能量，是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒的载体必须有活的细胞。培养病毒载体常用的有实验动物、禽胚和培养的细胞。第1节病毒的细胞培养一、细胞培养的特点及用途1、细胞培养中，每个细胞的生理特性基本一致，对病毒的易感性相同，没有实验动物的个体差异，不涉及动物保护问题。2、数量大，可在无菌条件下进行标准化的试验，可重复性好。3、观察细胞产生的变化或结合免疫学技术、核酸检测技术，可以检测病毒的增殖情况。4、用于分离病毒以及病毒克隆。二、细胞培养的类型1、原代细胞（1）概念：动物组织经胰蛋白酶等消化、分散，获得单个细胞，再生长于培养器皿中。（2）来源:动物或禽胚胎、幼龄动物组织，常用胚胎、肾和睾丸等。最好用SPF动物或胚。（3）特点：对病毒敏感，容易带毒。鸡胚成纤维细胞的制备过程（1）概念：将长成的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代。细胞染色体数与原代细胞一样，仍为二倍体。（2）特点：细胞数量大，对病毒的易感性与原代细胞形似。但巨噬细胞、神经细胞等体外培养不分裂，很难获得二倍体细胞株。（3）用途：常用于分离病毒。2、二倍体细胞株（1）概念：来源于肿瘤组织或转化的细胞，染色体数目为异倍体，能无限体外培养。（2）特点：传代及培养方便；有的对分离野毒（即样本中的病毒）不敏感；易污染支原体或隐性感染的病毒；有致肿瘤的潜在危险，一般不能用于制备疫苗；传代细胞系均有通用的名称，有专门机构负责鉴定和保管，如ATCC等。3、传代细胞系MDBK细胞三、细胞培养的方法1、静止培养2、旋转培养3、悬浮培养（1）概念：通过搅拌使细胞处于悬浮状态，并补充营养和校正pH，使之生长或维持存活。（2）用途：适用于某些不需要贴壁生长的细胞系，如NS-1（一种骨髓瘤细胞系），或作某种特殊研究之用。4、微载体培养（1）概念：是在悬浮培养的基础上，结合微载体的细胞培养技术。微载体可贴附细胞，使其长成单层。（2）用途：微载体数量多，单位体积的表面积较大，可规模化疫苗生产。第2节病毒与细胞的相互作用一、相关概念1、杀细胞感染与非杀细胞感染：前者指病毒感染细胞，使之发生病理变化而死亡；后者指病毒感染细胞不杀死细胞。2、生产性感染和非生产性感染：前者指感染病毒细胞释放出有感染性病毒粒子；后者指感染细胞不产生有感染性病毒粒子。3、允许性和非允许性细胞感染：细胞使病毒完成完整复制周期，称为允许性细胞感染；不能使病毒完成复制周期的感染，称为非允许性细胞感染。4、病毒致细胞病变效应（CPE）：病毒在细胞内增殖，引起细胞损伤，在光学显微镜下可见。二、病毒与细胞相互的类型多瘤病毒、腺病毒鼠、禽白血病病毒否，致肿瘤DNA病毒是，致肿瘤反录病毒细胞形态改变，细胞可无限制传代移植至实验动物可产生肿瘤转化脑组织的犬瘟热病毒否，但可通过共培养等诱导通常无影响持续性、非生产性瘟病毒、砂粒病毒、狂犬病毒、大多数反录病毒是无CPE，细胞代谢无甚妨碍，细胞继续分裂，某些分化的细胞可失去某些功能持续性、生产性甲型疱疹病毒、肠病毒、呼肠孤病毒是细胞病变（CPE），细胞蛋白质、RNA、DNA合成被抑制。细胞死亡杀细胞例证是否产生感染性病毒颗粒对细胞的影响感染的类型1、涉及细胞膜的CPE：有囊膜的病毒，出芽过程中能将其融合蛋白直接插入宿主细胞膜，导致膜融合以及合胞体形成。如：慢病毒、副粘病毒、麻疹病毒、肺病毒等。2、涉及细胞骨架的CPE：细胞骨架由微丝、中介丝及微管组成，与细胞结构的完整性、物质运输及运动性等有关。犬瘟热病毒、水泡性口炎病毒、痘苗病毒及疱疹病毒等能引致含actin的微丝解聚；肠病毒则能损坏微管，从而造成严重的细胞损伤，导致细胞崩解。三、病毒引致的杀细胞变化3、病毒引致的细胞凋亡与坏死：细胞的生理性死亡，亦即程序性死亡。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，内源性核酸内切酶被激活，将细胞DNA降解成180~200bp的片段，在琼脂糖凝胶电泳时可见特征性的电泳条带，称之为“梯带”。腺病毒、甲病毒、园环病毒科的鸡贫血病毒促进细胞凋亡。还有些病毒具有抗凋亡功能，延长细胞的生命，直至完成其子代病毒的复制周期。4、病毒感染抗体依赖的增强作用（ADE）在病毒感染过程中，宿主产生的抗体与病毒结合，不能阻断病毒吸附宿主细胞，增强了病毒对细胞的感染，提高了病毒的滴度。黄病毒、动脉炎病毒、狂犬病毒、冠状病毒等。5、细胞转化：致瘤病毒使细胞形态改变并转化成有多个分裂相的幼稚