DB64T1599-2019 TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测牛鹦鹉热嗜衣原体方法.pdf

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DB64

宁夏回族自治区地方标准

DB64/T1599-2019

TaqMGB探针实时荧光定量PCR检测牛鹦鹉

热嗜衣原体方法

2019-02-12发布2019一05-12实施

宁夏回族自治区市场监督管理厅发布

0864/T1599一－2019

目lj昌

本标准的编写格式符合GB/Tl.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求。

本标准由宁夏农林科学院提出。

本标准由宁夏回族自治区农业农村厅归口。

本标准由宁夏农林科学院动物科学研究所起草。

本标准主要起草人：梁小军、王建东、马吉锋、康晓冬、高海慧、于洋、李昕、杨炜迪、岳彩娟、

王晓薇、马乐天、何志军、宋学功、詹信忠、王琼、吴兰慧。

I

0864/T1599-2019

TaqManMGB探针实时荧光定量PCR检测

牛鹦鹉热嗜衣原体方法

1范围

本标准规定了利用TaqManMGB探针实时荧光定量PCR检测牛鹦鹉热嗜衣原体的术语、定义、方法。

本标准适用牛鹦鹉热嗜衣原体的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

TaqManMGB探针

TaqManMGB荧光探针是一种寡核昔酸探针，即可进行基因定量分析，又可分析基因突变。

3.2

实时荧光定量PCR

通过实时监测PCR反应中的荧光信号强度，实现对起始模板定量分析的一种技术。

4测定方法

4.1试剂和材料

除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，水为无菌双蒸水。

4.1.1引物：5’－GGCACCATGTGGGAAGGTGCTTG汀’

5’一GTCATTTGGAGAGGATCCTGTG-3’

4.1.2Taq-MGB拐污十：FAM-5’－GCGCAGGATACTACGGAGATTATG-NFQ-MGB-3’。

4.1.3TaqDNA聚合酶。

4.1.4dNTP:dATP、dTTP、dCTP、dGTP。

DB64/T1599一－2019

4.1.5DNA提取试剂：0.1%Chelex100水溶液。

4.1.610×PCR缓冲液：200日1mol/LTris-HCL(PH8.4),200mmol/Lkcl,15mmol/LMgcl20

4.1.7阳性株鹦鹉热衣原体SX5株（牛源〉。

4.2仪器和设备

4.2.1IQ5(RD）荧光定量PCR仪。

4.2.2高速离心机：20OOOr/min。

4.2.3移液器：2.5µL、20µL、200µL、1000µL。

4.2.4水浴锅。

4.3检验步骤

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