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蜡样芽胞杆菌在不同标本中的毒力基因分布特征

张慧娟;张恩民;贺金荣;李伟;魏建春

【期刊名称】《《中国人兽共患病学报》》

【年(卷),期】2019(035)008

【总页数】5页(P683-687)

【关键词】蜡样芽胞杆菌;毒力基因;疾病相关标本;分布特征

【作者】张慧娟;张恩民;贺金荣;李伟;魏建春

【作者单位】传染病预防控制国家重点实验室中国疾病预防控制中心传染病预防

控制所北京102206

【正文语种】中文

【中图分类】R378.8

蜡样芽胞杆菌(简称蜡样杆菌)在自然界广泛分布，常存在于土壤、灰尘和昆虫中，

植物和许多生熟食品中也常见，临床上该菌被认为是一种机会致病菌常引起食源性

疾病，也被认为是一种污染菌引发外伤性眼内炎、骨科创面感染以及在肿瘤等免疫

低下人群中引起院内感染等肠道外感染疾病[1]。

研究表明，无论是肠道内还是肠道外感染，发病均与该菌分泌的毒素导致组织破坏

或胞外酶活性产物有关，编码这些毒素的毒力基因主要包括溶血性BL基因(hblC、

hblD、hblA、hblB)、非溶血性基因(nheA、nheB、nheC)、肠毒素FM基因和T

基因(entFM、bceT)、细胞毒素K基因(cytK)和呕吐毒素相关基因(ces)[2]。但并

不是所有蜡样杆菌都含有全部毒力基因，而是存在菌株间的差异，不同的毒力基因

分布与疾病的严重程度呈相关性[3]。我国部分地区已在食品的常规监测中开展了

蜡样杆菌的污染与毒力基因的检测工作，本研究中采集了我国12个省的不同分离

来源的标本进行了毒力基因的检测，以期深入了解临床相关蜡样杆菌的遗传分布特

征，为相关疾病的诊断处置提供科学的参考依据。

1材料与方法

1.1菌株菌株包括分离自中国河北、海南、云南、内蒙、四川、陕西、福建等12

个省的蜡样杆菌330株和购买的模式菌株3株(ATCC10876、ATCC13061和

CMCC63301)，分离来源分为环境监测标本(常规食品微生物监测及土壤)和疾病相

关标本(食物中毒食品及肠道外感染)2大类，具体包括米粉(96株)、奶粉(125株)、

土壤(92株)、米饭(8株)、凉皮(5株)、眼内炎(2株)或肿瘤患者(2株)等6种标本，

所有菌株均由本室保存。

1.2毒力基因检测

1.2.1合成引物针对上述的11个蜡样杆菌可能含有的毒力基因，参考文献检索引

物序列[4-5]，每对引物经NCBIBlast比对验证，确为相应毒力基因片段，引物合

成由北京天一辉远生物科技有限公司完成，引物序列及扩增片段长度见表1。

1.2.2PCR扩增常规煮沸法制备菌株DNA模板，普通酶链聚合反应(PCR)方法扩

增所有毒力基因片段，同时设立阳性和阴性对照。PCR反应体系为25μL，包括

2×EasyTaqTMPCRSuperMix(购自北京全式金生物技术有限公司)12.5μL，上下

游引物各1μL(浓度10μM)，DNA模板1μL(浓度为100ng/μL左右),加无菌超

纯水补足至25μL。PCR反应条件为95℃预变性5min；95℃变性1min,55℃

退火1min,72℃延伸1min,共30循环；72℃最后延伸5min，产物经1%琼脂

糖凝胶电泳检测。

表1本研究检测毒力基因所用引物Tab.1Primersforvirulencegenesof

B.cereus

基因引物引物序列(5′-3′)长度/bphblAHA-FTTACCTGGTAGAATCGTA-

CAAGATC164HA-RCCTGTATTAATCGCTTCTACCAT-TGhblBHB-

FAAGCAATGGAATACAATGGG2685HB-

RAATATGTCCCAGTACACCCGhblCHC-FCCTATCAATACTCTCGCAA695HC-

RTTTCCTTTGTTATACGCTGChblDHD-FACCGGTAACACTATTCATGC830HD-

RGAGTCCATATGCTTAGATGCnheANA-

FGTTAGGATCACAATCACCGC756NA-

RACGAATGTAATTTGAGTCGCnheBNB-

FGTGCAGCAGCTGTAGGCGGT328NB-RATGTTTTTCCAGCTATCTTTCG-

CAATnheCNC-F