DB52T 1528-2020 紫苏品种鉴定技术规程 SSR标记法.docxVIP

ICS65.020.01CCSB36

DB52

贵州省地方标准DB52/T1528—2020

紫苏品种鉴定技术规程SSR标记法

Protocolfortheidentificationofperillavarieties—SSRmarkermethod

2020-11-13发布2021-03-01实施

贵州省市场监督管理局发布

I

DB52/T1528—2020

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语与定义 1

4原理 1

5仪器设备及试剂 2

6溶液配制 2

7引物信息 2

8参照品种准备 2

9操作步骤 2

10数据记录与统计 3

11结果判定 4

附录A（资料性）主要仪器设备及试剂 5

附录B（资料性）溶液配制 7

附录C（资料性）推荐引物名单及序列 9

附录D（资料性）参照品种等位变异位点 11

附录E（资料性）参照品种名单 15

II

DB52/T1528—2020

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由贵州省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：贵州省油菜研究所。

本文件主要起草人：沈奇、温贺、王仙萍、徐静、商志伟、杨森、杜才富、陈俊琨、田飞、汤勇。

1

DB52/T1528—2020

紫苏品种鉴定技术规程SSR标记法

1范围

本文件规定了利用简单重复序列（Simplesequencerepeat，SSR）标记法进行紫苏资源材料及品系品种鉴定的原理、仪器设备及试剂、溶液配制、引物信息、参照品种准备、操作步骤、数据记录与统计、结果判定等。

本文件适用于紫苏种质资源、品系品种的SSR标记鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T2494植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南紫苏

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

推荐引物RecommendedPrimer

品种鉴定中优先选用的一套SSR引物，具有多态性高，重复性好等综合特性。3.2

参照品种ReferenceVariety

具有所用SSR位点上不同等位变异的品种。参照品种用于辅助确定待测样品的等位变异，校正仪器设备的系统误差。

3.3

SSR指纹图谱SSRFingerPrint

品种或材料特征性的SSR变异位点集合，代表着以品种特有的基因组DNA中简单重复序列特征。

4原理

由于不同紫苏品种遗传组成不同，基因组DNA中简单重复序列的重复次数存在差异，这种差异可通过DNA提取、PCR扩增以及聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）或毛细管电泳荧光检测进行检测，从而能够区分紫苏资源材料及品系品种。

2

DB52/T1528—2020

5仪器设备及试剂

详见附录A。

6溶液配制

参照附录B的要求执行。

7引物信息

推荐引物名单及序列参见附录C，推荐引物等位变异等相关信息参见附录D。

8参照品种准备

参见附录E。

9操作步骤

9.1材料准备

随机取5个单株的组织或器官（种子，幼苗，叶片，苞叶，花，果穗等）。9.2DNA提取

CTAB提取法：幼苗或叶片500mg，置于研钵，加液氮充分研磨，或取种子充分磨碎，称取100mg移入2mL离心管；每管加入600μL，65℃预热的CTAB提取液，充分混合，65℃保温60min，期间多次颠倒混匀；每管加入等体积的三氯甲烷／异戊醇混合液，充分混匀，静置10min；12000r离心15min后，吸取上清液至一新离心管，再加入等体积的三氯甲烷／异戊醇混合液，充分混匀，静置10min，12000r离心15min。吸取上清液至一新离心管，加入2倍体积的预冷乙醇，置于-20℃冰箱过夜放置后12000r离心15min，弃上清液；加入70%乙醇，旋转离心管数次，弃去乙醇，室内干燥沉淀6h以上；加入100μL超纯水或TE缓冲液，充分溶解后备用。

注：以上为推荐的DNA提取方法，其他达到PCR扩增质量要求的