RNAi抑制小鼠树突细胞共刺激通路的体外研究的开题报告 .pdfVIP

RNAi抑制小鼠树突细胞共刺激通路的体外研究的开

题报告

一、研究背景和意义：

树突状细胞为TheodoreH.Yearger等科学家所发现，在20世纪70

年代被正式命名。树突状细胞是一类具有高度表面表现性和极其多样化

的细胞，是机体最重要的专业抗原提呈细胞，可分化为各种形态和各种

分子状态的亚型。共刺激通路是指参与T淋巴细胞激活所必需的刺激分

子路径，主要包括的分子为B7结合蛋白家族成员（如B7-1、B7-2和B7-

H2等）和其T淋巴细胞对应的受体（如CD28和CTLA-4等）。研究发

现，树突细胞共刺激通路在免疫应答中发挥着非常重要的作用。因此，

对树突细胞共刺激通路的研究将有助于进一步理解机体免疫调节及其发

病机制，也有助于指导相关疾病的临床治疗。

RNAi（RNA干扰）是由HowardHughesMedicalInstitute的

NapoleonSpiner等人在1998年发现的一种基于RNA转染后导致特定基

因表达沉默而实现的技术。RNAi技术可以通过基因靶向干扰机理使目标

基因的蛋白质表达减少或消失，从而实现疾病基因治疗的目的。RNAi技

术在分子生物学和基因治疗等领域发挥着重要的作用，已成功应用于细

胞生物学、生物医学、植物基因工程等多个领域。

二、研究目的和内容：

研究目的是探究RNAi抑制树突细胞共刺激通路的效果和相关机制，

并评估其对机体的免疫功能的影响。

研究内容包括：

（1）构建RNAi载体

（2）利用RNAi技术抑制树突细胞共刺激通路

（3）检测共刺激通路相关分子的表达水平

（4）体外评估RNAi对树突细胞功能的影响

（5）评估RNAi抑制树突细胞共刺激通路的效果和机体免疫功能的

影响

三、研究方法和技术路线：

根据文献和已有研究，本研究拟采用以下方法和技术路线：

（1）构建RNAi载体：选取共刺激通路相关分子靶点，设计RNAi

靶向序列并进行合成，构建载有RNAi靶向序列的质粒，如pGPU6、

pSilencer等。

（2）制备树突细胞：从小鼠骨髓中分离树突细胞，经过特定条件

的诱导和分化，制备出高纯度的树突细胞。

（3）利用RNAi技术抑制树突细胞共刺激通路：将RNAi载体转染

进制备好的树突细胞中，使用Westernblot等方法检测共刺激通路相关

分子的表达水平。

（4）体外评估RNAi对树突细胞功能的影响：测定树突细胞的形态

学和细胞活力，采用T淋巴细胞激活、漂移、增殖和分泌相关指标等方

法评估RNAi对树突细胞功能的影响。

（5）评估RNAi抑制树突细胞共刺激通路的效果和机体免疫功能的

影响：采用小鼠模型评估RNAi抑制树突细胞共刺激通路对机体免疫功能

的影响，比较RNAi前后机体的免疫功能差异。

四、研究预期结果和意义：

预期结果：

（1）构建RNAi载体成功，树突细胞成功转染RNAi载体。

（2）RNAi抑制树突细胞共刺激通路的效果显著。

（3）RNAi抑制树突细胞共刺激通路后，树突细胞的功能发生改变。

（4）RNAi抑制树突细胞共刺激通路后，机体免疫功能发生改变。

研究意义：

（1）本研究将探究RNAi技术抑制树突细胞共刺激通路的效应，为

研究共刺激通路的新方法提供参考。

（2）本研究将进一步拓展RNAi技术在免疫调控中的应用，促进免

疫功能治疗的发展。

（3）本研究将为机体免疫功能的相关疾病的治疗和预防提供理论和

实证基础。