分子生物学与基因工程复习提纲-2020.docx

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分子生物学与基因工程

（以ppt为主，详细内容参考书本）

名词解释

增色效应、DNA变性、DNA的熔点（Tm）、复制起始点（Ori）、冈崎片段、启动子、终止子、顺式作用元件、反式作用因子、操纵子、操纵基因、增强子、感受态细胞(competentcell)、开放阅读框架、基因、基因工程、RNAi、不依赖r因子的终止、SD序列等（须认识英文名称）

简答或问答

RNA的主要种类和功能。(见书本P72)

原核生物DNA半保留和半不连续复制机理。（见PPT）

比较原核生物与真核生物mRNA转录的相同点和不同点。（见后面）

增强子的特点。（理解并应用知识点，见后面）

遗传密码特征，起始密码子和终止密码子。

PCR的原理，包括它的特异性。（会依据要求设计PCR流程，会简述流程中每一步的作用）（见PPT）

*PCR和细胞内DNA复制两者有哪些主要的相同点和不同点。（见PPT）

双向电泳（Two－DimensionalElectrophoresis，2-D）技术的原理。（见PPT，或书本P198）

Southernblot,Northernblot,Westernblot三种分子生物学技术差异。

乳糖操纵子和色氨酸操纵子的调控机制。（见PPT）

真核生物调控：（1）在哪些层次上调控的(2)DNA水平调控的方式（3）反式作用因子各结构域的模式

DNA序列与蛋白功能（表型）非线性关系。（见后面）

pTXB1表达质粒T7promotor,Lacoperator,SD,MCS，Intein,CBD,Stopcode,ori,Amp,LacI等功能元件的作用。

基因工程的应用。(见PPT)

将目的DNA分子的平末端转变成粘性末端的3种方法。（结合图进行说明，见PPT）

λ-DNA载体的优点。（见PPT）

质粒载体（改造）的基本要求。（见PPT）

Ⅱ型核酸内切酶基本特征（见PPT）

真核生物基因组的结构特点。（P31）

什么是基因工程受体菌？要求？（见PPT）

分子克隆的流程。（见PPT）

真核生物与原核生物mRNA的区别。（见作业本，5个方面）

3．比较原核生物与真核生物mRNA转录的相同点和不同点。

答：(1)原核生物与真核生物mRNA转录的相同点：

1

RNA转录的一般过程

模板识别(启动子识别)–转录起始–通过启动子–转录的延伸–终止

2

转录的原料

RNA聚合酶;双链DNA模板;NTPs;辅助因子;都不需要引物

3

转录的方向

5’—

4

信息传递的方式

碱基互补

5

产物

单链RNA

（2）原核生物与真核生物mRNA转录的不同点：

比较对象

原核生物

真核生物

1

转录后加工

无

5’加帽，3

2

调控

多个基因的操纵子调控

单基因调控，具有增强子，沉默子等调控元件

3

转录与翻译的关系

偶联

分开

4

启动子的保守序列

-10box;-35box

TATAbox;

GCbox;CAATbox

5

转录终止子

有两种终止子

没有明确的终止子，但有终止信号

6

聚合酶

全酶=核心酶+s

识别启动子不需要其它因子

RNA聚合酶II，需要转录因子的协助才能与启动子结合。

4.增强子的特点。（理解并应用知识点，见后面）

例：已知H是鸡输卵管细胞特异的增强子,A、B是位于鸡输卵管细胞同一染色体上相邻的两个表达基因,C是鸡输卵管细胞另一染色体上的表达基因,D是人类的干扰素基因.

(1) 用基因工程的方法,将H插入到鸡输卵管细胞A、B基因之间，此时A、B、C基因的表达情况将会有何变化，为什么？

(2) 用基因工程的方法,将H插入到鸡表皮细胞A、B基因之间，此时A、B、C基因的表达情况将会有何变化，为什么？

(3) 用基因工程的方法,将A基因的启动子和D基因一起插入鸡输卵管细胞染色体上，发现能表达人类的干扰素蛋白，若再将H插入到D基因的内含子中，D基因的表达情况将会有何变化，为什么？

11.DNA序列与蛋白功能（表型）非线性关系。例：真核生物一个重要基因的DNA序列发生了变异，但该生物体表型却未发生变化（即蛋白表达和功能未变），试分析可能原因。

答：可能原因有:(1)突变发生的位置不在调控区和编码区(如内含子区域或其它区域),不影响基因的表达;(2)突变发生在编码区,但由于mRNA选择性剪切或者由于蛋白前体加工而被除去,不影响最终蛋白的功能;(3)突变发生在编码区,但由于存在密码子的简并性,并没有改变对应的氨基酸,蛋白功能不变;(4)突变改变了氨基酸,但变异的氨基酸是蛋白中不重要的氨基酸,不影响蛋白的功能;(5)突变改变了蛋白功能相关的重要氨基酸,但两种氨基酸性质相近,不影响蛋白的