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饲用酶制剂的酶活检测方法及评定

随着我国畜牧业的发展和生物工程技术的不断进步，酶制剂在饲料工业中的应用越来越多。

由于酶制剂能够消除饲料中的某些抗营养因子的负面作用，提高饲料消化率，改善动物生产

性能，降低生产成本，因此日益受到饲料界的重视。

但是，由于酶制剂来源比较复杂、分子结构不明确，分离提纯困难等多种原因，使这类产品

有国家标准的不多，即使有国标也存在一些问题。给广大养殖用户和生产企业带来很大不便。

本文简单介绍一下常用的酶活测定方法及测定过程的影响因素，仅供广大饲料工作者提供参

考。

1酶制剂的定义及分类

所谓的酶制剂就是通过产酶微生物发酵工程

或含酶的动、植物组织提取技术生产加工而成，具

有一种或多种底物清楚的酶催化活性，有助于改

善动物对饲料营养成分的消化、吸收等，并有功效

的生物学评定依据，符合安全性要求，作饲料添加

剂用的酶制剂产品（NY/T722-2003）。工业上应用

的酶制剂大多为水解酶，按作用底物的不同，可分

为淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、木聚糖酶、果

胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等。按动物体内是否分

泌，分为消化酶和非消化酶两大类。消化酶指动物

自身能够分泌的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等，在幼

龄动物或特殊生理阶段时，动物也存在消化酶分

泌不足需要外源供给的情况。非消化酶是指动物

自身不能够分泌或很少分泌，必须由外源供给的

酶，这类酶能消化动物自身不能消化的物质或降

解一些抗营养因子，主要有植酸酶、木聚糖酶、果

胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等。

2常见的酶活测定方法

通常酶制剂活性的检测是采用实验室分析手

段来进行评价，它可以用来筛选优质酶制剂、确定

复合酶制剂的最佳组方及确定产品的最佳添加量

等，酶制剂实验室评价技术是目前饲料厂家应用

最为广泛的一种方法。其操作相对简单，检测所用

时间短，便于生产实践应用。酶活测定结果虽不能

完全反映酶的使用效果，但通过检测至少可以避

免使用劣质的酶制剂。我国饲料工业标准中已经

确立了饲用植酸酶（GB/T18634）、纤维素酶（NY/T

912）、β—葡聚糖酶（NY/T911）的测定方法。另外，

许多企事业单位为了生产研究的需要也制定了很

多用于各种酶制剂活力的测定方法。目前测定酶

制剂活性的方法主要有：

2.1比色法

比色法是以反应生成有色化合物的显色反应

为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度

来确定待测组分含量的方法，根据原理不同可分

为还原糖法和色原底物法。

2.1.1还原糖法。这种方法是通过酶作用于化

学合成或从自然界提取出来的底物来进行测定

的。非淀粉多糖酶与底物在特定的条件（温度、pH

值和底物浓度）下反应，反应产物为还原糖，在与

显色剂反应后，通过比色确定还原糖的生成量，同

时制作标准曲线。酶的活性表示为单位时间产生

一定浓度的产物所需要的酶量（mg或mL）。该法可

适用于大部分酶活力的测定，如淀粉酶、蛋白酶、

脂肪酶、植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、

纤维素酶等的测定。根据显色剂的不同又可分为

DNS法、钒钼酸铵法和地衣酚法。其中DNS法由于

操作简单、显色稳定，是目前众多实验室和饲料企

业在测定非淀粉多糖酶时应用最多的测定方法。

2.1.2色原底物法。原理是利用人工合成的含

色原基团的底物在酶的作用下释放出有色物质，

利用分光光度计比色测定有色物质的含量计算酶

活。如木聚糖酶活力的测定。该法操作简单、重现

性好，但酶作用于合成底物与天然底物的效果有

一定区别，用合成底物测定的酶活并不能代表酶

制剂在应用于天然饲料时所能发挥的酶活大小。

2.2黏度法

这种方法是根据酶能够降低一定浓度的标准

底物（控制pH值、温度等条件）的黏度的能力来确

定酶的活性。利用的底物主要有化学合成的底物

（如CMC用于纤维素酶的测定）和自然提取的底

物（如小麦阿拉伯木聚糖用于木聚糖酶的测定）。

测定的酶的活性值是通过与同时测定的标准酶活

性的比较，来确定酶的活性。该法可用于木聚糖

酶、β—甘露聚糖酶、β—葡聚糖酶等酶活测定。

这种方法的特点是通过降低底物的粘度来反

映酶的活性，这也正是酶在体内起作用的重要特

征。该法虽然灵敏度较高，但重现性差，操作复杂

费时，应用难于普及。

2.3免疫学法

用于酶活性分析的免疫学法包括ELISA法和

免疫凝胶扩散法。这两种方法是根据酶与抗体之

间发生反应，然后ELISA法通过第二步反应，凝胶

扩散法则通过印染过程来确定酶的活性。

这些方法非常灵敏，能够检测