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高效液相色谱法的实验结果详细分析

高效液相色谱法与气相色谱法的定性分析和定量分析方法（包

括测定方式和计算方法）相同。在定性分析中，有用纯物质对照的色

谱鉴定法，还有收集馏分与化学方法或其他仪器分析方法联用的非色

谱鉴定法；在定量分析中，可以用峰高或峰面积以内标法、外标法或

归一化法定量，并与微机联用作为现代化的分析工具。

一、定性分析

色谱分析法定性分析的目的就是确定每个色谱峰代表什么组分，

从而确定由这些组分所构成的混合物试样的组成。常用的主要定性方

法有色谱鉴定法和非色谱鉴定法两种。

1、色谱鉴定法定性

色谱鉴定法就是用纯物质对照定性，这是气相和高效液相色谱法

中最常用的最方便的一种定性方法，可以和定量测定操作同时进行。

(1)利用保留值定性

在色谱条件一定的情况下（包括柱长、柱内径、固定相、柱温、

流动相及流速等），每一种物质都有其一定的保留值（包括保留时间、

保留体积、调整保留时间、调整保留体积等），一般不受其他组分的

影响，可以作为定性的根据。此法又称为纯物质对照定性。

在相同的色谱条件下，先测定未知物中每个色谱峰的保留时间

或保留距离，再将要测的某纯物质注入色谱仪，对照比较两者的保留

值，如果两者的保留值相同，就可判定该未知物与已知纯物质是同一

种物质。

(2)利用加入纯物质增加峰高法定性

在稳定的色谱条件下，为了区分两个保留值（保留时间或保留距

离）非常接近的组分，可以将某纯物质直接加入到试样中，再注入色

谱仪，如果某组分峰的峰高增加了，表明这个色谱峰就是加入的纯物

质。此法又称为纯物质追加法定性。

色谱鉴定法定性需要有纯物质对照，在没有纯物质时，可以用非

色谱鉴定法定性。

2、非色谱鉴定法定性

(1)利用文献或相关工具书

查相对保留值定性任何一个实验室都不可能配备所有物质的纯

品，没有纯物质将无法定性，所以可以利用国内外其他实验室的色谱

工作者在《分析化学》或《色谱分析》刊物上发表的具有相对保留值

和保留指数（Ix）数据的论文（文献）。早期的文献数据已收录在《分

析化学手册》中。只要在相同的色谱条件下，这些数据能得到重现，

就可以用来定性。

某组分i的相对保留值ris、是组分i与另一个标（基）准物质s

的调整保留值的比值，即式中tRi即为组分i的调整保留时间，tRs

即为标（基）准物质s的调整保留时间，VRi为组分i的调整保留体

积，mL;VRs为标（基）准物质s的调整保留体积，mL。

当流动相（载气或洗脱剂）的流速固定不变时，调整保留体

积就等于调整保留时间，则组分i的相对保留值ris仅与固定液、柱

温有关，与其他操作条件无关，可查《分析化学手册》中的液相色谱

分析部分或相关文献。在《分析化学手册》或文献相同操作条件下比

较相对保留值，如果被测组分与《分析化学手册》或文献上某组分相

对保留值相同，则该组分就是《分析化学手册》或文献上的同一种物

质。

(2)利用保留指数定性

利用保留指数I定性是1958年科瓦特（Kovats）提出来的，直

到现在仍是国际上公认的使用最广泛的定性参数。规定某物质X的保

留指数I可以用色谱峰及与它紧相邻的正构烷烃的标准物质的有关数

值进行计算（用均一标度，不用对数），即规定正构烷烃的保留指数

I等于该正构烷烃分子中所含有碳原子个数Z的100倍。保留指数I

只与固定液的性质有关，与其他操作条件无关。某物质X的保留指数

IX也可以用调整保留距离、调整保留体积进行计算。

在进行定性分析时，将选好的两个正构烷烃与待测物质混合均

匀，按照《分析化学手册》或文献上规定的固定相和柱温进行色谱分

析，得到色谱峰后计算待测物质的保留指数IX，与《分析化学手册》

或文献上已知物质的保留指数对照比较，如果与某已知物的保留指数

相同，就可判定两者是同一种物质。科瓦特保留指数定性在高效液相

色谱法定性分析中也经常使用。

(3)利用化学反应定性

将化学反应与色谱分析法相结合有利于对含有复杂官能团的组

分进行定性分析。可与柱前、柱中和柱后预化学处理法结合定性。

利用柱前预化学处理法定性

某些含有特殊官能团的化合物能够与特殊的化学试剂反应，生成