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比色法

比色法(colorimetry)是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组

分含量的方法。早在公元初古希腊人就曾用五倍子溶液测定醋中的铁。1795年，

俄国人也用五倍子的酒精溶液测定矿泉水中的铁。但是，比色法作为一种定量分

析的方法，大约开始于19世纪30～40年代。

定义

以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜

色深度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种定量分析的方法，开

始于19世纪30～40年代。比色分析对显色反应的基本要求是：反应应具有

较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它

和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，

是比色分析的关键。常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，

两种方法都是以朗伯-比尔定律[1](A＝εbc)为基础。常用的目视比色法是标准

系列法，即用不同量的待测物标准溶液在完全相同的一组比色管中，先按

分析步骤显色，配成颜色逐渐递变的标准色阶。试样溶液也在完全相同条

件下显色，和标准色阶作比较，目视找出色泽最相近的那一份标准，由其

中所含标准溶液的量，计算确定试样中待测组分的含量。光电比色法

是在光电比色计上测量一系列标准溶液的吸光度，将吸光度对浓度作图，

绘制工作曲线，然后根据待测组分溶液的吸光度在工作曲线上查得其浓度

或含量。与目视比色法相比，光电比色法消除了主观误差，提高了测量准

确度，而且可以通过选择滤光片来消除干扰，从而提高了选择性。但光电

比色计采用钨灯光源和滤光片，只适用于可见光谱区和只能得到一定波长

范围的复合光，而不是单色光束，还有其他一些局限，使它无论在测量

的准确度、灵敏度和应用范围上都不如紫外-可见分光光度计。20世纪30～

60年代，是比色法发展的旺盛时期，此后就逐渐为分光光度法所代替。

基本反应

比色法是以生成有色化合物的显色反应为基础的，一般包括两个步骤：

首先是选择适当的显色试剂与待测组分反应，形成有色化合物，然后再比

较或测量有色化合物的颜色深度。比色分析对显色反应的基本要求是：①反

应应具有较高的选择性，即选用的显色剂最好只与待测组分反应，而不与

其他干扰组分反应或其他组分的干扰很小；②反应生成的有色化合物有恒定

的组分和较高的稳定性；③反应生成的有色化合物有足够的灵敏度,摩尔吸

光系数一般应在104以上；④反应生成的有色化合物与显色剂之间的颜色差

别较大，它们的最大吸收浓度之差一般应在60纳米以上。选用的显色剂可

以是一种试剂，也可以是两种不同的试剂。如果待测组分与两种不同的试

剂反应生成一种有色化合物，则称为三元络合物显色反应。这类显色反应

常常具有更高的灵敏度和选择性，在比色法和紫外-可见分光光度法中应用

非常普遍。选择适当的显色反应，研究最合适的反应条件和消除干扰的方

法是比色分析的关键问题。溶液的酸度、显色剂的用量、温度、溶剂等对

显色反应都有影响。

常见方法

常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，前者用眼睛观察,后

者用光电比色计测量,两种方法都是以朗伯－比尔定律（见紫外-可见分光光

度法）为基础。

目视比色法

常用的目视比色法是标准系列法，该法采用一组由质料完全相同的玻

璃制成的直径相等、体积相同的比色管，按顺序加入不同量的待测组分标

准溶液，再分别加入等量的显色剂及其他辅助试剂，然后稀释至一定体积，

使之成为颜色逐渐递变的标准色阶。再取一定量的待测组分溶液于一支比

色管中，用同样方法显色，再稀释至相同体积，将此样品显色溶液与标准

色阶的各比色管进行比较，找出颜色深度最接近于样品显色溶液的那支标

准比色管，如果样品溶液的颜色介于两支相邻标准比色管颜色之间，则样

品溶液浓度应为两标准比色管溶液浓度的平均值。标准系列法的主要优点

是设备简单和操作简便，但眼睛观察存在主观误差，准确度较低。

光电比色法

光电比色法是在光电比色计上测量一系列标准溶液的吸光度，将吸光

度对浓度作图，绘制工作曲线，然后根据待测组分溶液的吸光度在工作曲

线上查得其浓度或含量。光电比色计通

常由光源（钨灯）、滤光片、吸收池、接收器(光电池或光电管)、检流计

五部分组成（见图）。光路结构上有单光电池式和双光电池式两种：单光电

池式仪器的测量结果受光源强度变化影响较