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内皮细胞特异性分子在肾透明细胞癌组织中的表达及意义

邱涛;刘修恒;周江桥;张龙;汪志顺;祝恒成

【摘要】目的观察不同临床分期肾透明细胞癌的内皮细胞特异性分子(ESM-1)的

表达差异,以探讨ESM-1与肿瘤发生及恶性程度的相关性.方法收集肾透明细胞癌

组织、正常肾组织以及癌旁组织标本,进行免疫印迹和免疫组化染色,并根据蛋白条

带的灰度值和免疫组化结果进行定量评分,同时监测患者血清中ESM-1的表达水平.

结果免疫印迹显示肾透明细胞癌标本中ESM-1表达灰度为2.12±0.23,免疫组化

显示肾透明细胞癌中ESM-1阳性染色评分为2.1±0.94,相比癌旁组织组和正常肾

组织组,差异均有统计学意义(P＜0.05);且ESM-1血清中表达量较正常组升高.结论

检测ESM-1的表达有助于判断肾透明细胞癌的预后.

【期刊名称】《现代泌尿外科杂志》

【年(卷),期】2016(021)004

【总页数】3页(P307-309)

【关键词】肾透明细胞癌;免疫组化;内皮细胞特异性分子(ESM-1)

【作者】邱涛;刘修恒;周江桥;张龙;汪志顺;祝恒成

【作者单位】武汉大学人民医院:器官移植科,湖北武汉430060;武汉大学人民医院:

泌尿外科,湖北武汉430060;武汉大学人民医院:器官移植科,湖北武汉430060;武汉

大学人民医院:泌尿外科,湖北武汉430060;武汉大学人民医院:泌尿外科,湖北武汉

430060;武汉大学人民医院:泌尿外科,湖北武汉430060

【正文语种】中文

【中图分类】R737

·基础研究·

University,Wuhan430060,China)

肾癌是泌尿系统的常见肿瘤。早期局限性肾癌可以通过外科手术切除达到治愈目的，

但晚期肾癌丧失手术机会，同时透明细胞癌对放疗、化疗都不敏感。近几年来出现

的激酶抑制剂如索拉菲尼、舒尼替尼等靶向治疗药物可以延缓晚期肾癌患者的生存

期。内皮细胞特异性分子(endothelialcell-specificmolecule1,ESM1)是血管内

皮细胞上特异性表达的分子标志物，在肺和肾脏的血管内皮细胞上特异性表达，在

肺癌、乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤中也呈高表达[1-2]，但在肾透明细胞癌中的表

达研究不多[3]。本文收集肾透明细胞癌的组织标本检测ESM-1的表达，希望为肿

瘤的预后提供新的分子标志。

1.1一般资料基于纳入和排除标准收集到武汉大学人民医院2012年1月至

2014年12月进行的肾切除术获取的肾透明细胞癌标本34例，统计患者的基本资

料以及肿瘤的分期。肾透明细胞癌的癌旁组织标本和外伤性切除肾组织作为对照组。

二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，BCA)试剂盒购自碧云天公司，ESM-1兔抗人抗

体，二抗购置SANTCRUZ公司。

纳入标准：根据病理诊断肾透明细胞癌，年龄在18岁以上。

排除标准：排除术前合并其他系统肿瘤，排除术前进行过放疗、化疗等干预肿瘤操

作，排除病检合并其他来源的肾癌，排除高血压、糖尿病。

1.2标本收集与处理获得的新鲜组织，经10%甲醛固定，石蜡包埋，4～5μm

厚切片，HE染色，光镜观察，经病理科医师确诊。

1.3ESM-1表达的检测方法

1.3.1免疫印迹分析取300mg标本，利用细胞裂解液冰上裂解，30min后

12000g，离心5min获得上清液，利用BCA蛋白浓度试剂盒测定蛋白浓度，-

80℃保存。取20μg上样量电泳，转膜，洗涤，封闭，用1∶1500的兔抗人

ESM-1抗体孵育过夜，洗涤后1∶2000的抗兔二抗孵育1h后洗涤显影，β-

actin作为内参对照。用凝胶图像分析仪测量条带灰度值，计算目的蛋白与内参比

值。

1.3.2免疫组化分析免疫组织化学采用SP法，DAB显色。一抗为兔抗人

ESM-1。以正常肾组织标本及RCCC癌旁组织标本为对照。结果分析，ESM-1免

疫组化染色以血管内皮细胞胞膜出现棕黄色颗粒为阳性，依阳性细胞所占比例不同

将染色结果进行计分统计，分为4个级别，阴性(0～10%)、1(10%～30%)、

2(30%～60%)、3(60%)。

1.3.3ELISA分析收集肾癌患者血清和正常对照组血清，按照ELISA试剂盒