【CN110055326A】预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物及其应用【专.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN110055326A

(43)申请公布日2019.07.26

(21)申请号201910176747.5

(22)申请日2019.03.08

(71)申请人宁波大学

地址315211浙江省宁波市江北区风华路

818号

(72)发明人王萍任雨王雪孙树本

陈一勇

(74)专利代理机构宁波市鄞州甬致专利代理事

务所(普通合伙)33228

代理人张鸿飞

(51)Int.Cl.

C12Q1/6886(2018.01)

C12N15/11(2006.01)

权利要求书1页说明书7页

序列表1页附图2页

(54)发明名称

预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物

及其应用

(57)摘要

本发明公开了一种预测肾透明细胞癌复发

转移的分子标记物及其应用。一种能够用于

ccRCC转移早期诊断的生物标记物，该标记物为

CREB基因的甲基化产物。本发明上述的用于

ccRCC转移早期诊断的生物标记物，具体通过提

取ccRCC病人手术后口服sunitinib药物血清中

DNA，经亚硫酸盐修饰后进行甲基化特异性PCR；

将得到的CREB基因甲基化；结果和病人在治疗过

程中的复发转移情况相结合，进而预测CREB基因

甲基化与ccRCC复发转移和生存之间的关系。具

有能够发现临床上早期肾癌患者的微转移，进而

调整治疗策略和正确评估预后的优点。

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权利要求书

CN110055326A1/1页

1.一种预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物，该标记物为：CREB基因的甲基化产

物。

2.根据权利要求1所述的预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物，其特征在于：具体

通过提取ccRCC病人手术后口服sunitinib药物血清中DNA，经亚硫酸盐修饰后进行甲基化

特异性PCR；将得到的CREB基因甲基化产物；结果和病人在治疗过程中的复发转移情况相结

合，进而预测CREB基因甲基化与ccRCC复发转移和生存之间的关系。

3.根据权利要求2所述的预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物，其特征在于：血清

基因组DNA提取、测定DNA浓度、亚硫酸盐修饰、甲基化特异性PCR、电泳和测序具体的操作过

程，操作步骤包括：

（1）病人纳入标准：行肾根治性或部分切除术，术后病理证实为T1a-T2b的ccRCC患者；

排除患有急慢性泌尿系统感染性疾病、结石和其他免疫缺陷的患者；

（2）病人新鲜血抗凝，用红细胞裂解液除去红细胞，破碎白细胞，除去杂蛋白，得基因组

DNA，Nanodrop测定DNA浓度；

（3）重亚硫酸盐修饰基因组DNA；

（4）将步骤（3）中修饰后基因组DNA进行甲基化特异性PCR扩增、电泳和甲基化测序；

（5）在甲基化和非甲基化引物的参与下，进行PCR反应；如果甲基化产物阳性，非甲基化

产物阴性，则说明此标本中只有甲基化DNA存在；如果甲基化产物阴性，非甲基化产物阳性，

则说明此标本DNA中只有非甲基化存在；如果甲基化和非甲基化均阳性，则说明此标本DNA

不完全甲基化；

（6）根据步骤（5）的标准，结合病人有无复发和转移发生，个体化预测病人的预后。

4.根据权利要求2所述的预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物，其特征在于：步骤

（2）所述的得基因组DNA所用的血清为10µl。