《微生物发酵技术》——项目八 分离技术.pptx

1.萃取分离技术项目八分离技术

中药现代化超临界流体萃取在薏苡仁脂性抗瘤有效成分提取项目上试验成功。我国中药萃取技术获重大突破。展示出巨大的产业化前景。每年还可节约数以万吨计的石油资源。

萃取分离技术定义：利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同，而使溶质得到纯化或浓缩的方法。应用：有机酸、氨基酸、抗生素、维生素、激素和生物碱等生物小分子。分类：液液萃取、液固萃取、双水相萃取和超临界萃取等。

基本概念被提取的溶液称为料液；从料液中提取出来的物质称为溶质；用来进行萃取的溶剂称为萃取剂；溶质转移到萃取剂中与萃取剂形成的溶液为萃取液；被萃取出溶质的料液称为萃余液。

乳化一种液体分散到另一种本不相溶的液体中，称为乳化现象。乳化现象的产生将直接影响溶剂萃取操作的效果，影响收率和产品质量。

1234离心分离稀释法升高温度吸附法5转型法破乳化

常用的去乳化剂十二烷基磺酸钠。属于阴离子表面活性剂，为淡黄色透明液体，易溶于水，微溶于有机溶剂，广泛用于红霉素的取。漠代十五烷基毗噬。一种棕褐色稠厚液体，广泛用于青霉素等抗生素的提取中。

萃取方式料液和萃取液充分混合形成乳浊液，目的产物自料液转入萃取液中。将乳浊液通过离心设备分成萃取液和萃余液。从萃取液或萃余液中回收萃取剂。（1）混合（3）溶剂回收（2）分离

2.沉淀分离技术

沉淀通过改变条件或加入某种试剂，引起物质的溶解度降低，生成固体凝聚物的现象。它具有设备简单、成本低、浓缩倍数高、收率高等特点。常用方法有盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法，今天我们着重学习一下其中的盐析法。定义：

盐析法又称中性盐沉淀法，在发酵液中加入高浓度中性盐能破坏蛋白质（或酶）的胶体性质，中和表面上的电荷，促使蛋白质（或酶）聚集成更大的分子团而沉淀。一般适用于蛋白质分离和酶制剂工业的发酵液粗提取。定义：无机盐不容易引起蛋白质变性失活，盐析过程中非蛋白的杂质很少被夹带沉淀下来，适用范围广，几乎所有的蛋白质和酶都能采用，设备简单，操作方便。优点：沉淀物中含有大量盐析刑，需要进行脱盐处理，才能进行后续的纯化操作。缺点：

盐析法蛋白质（或酶）等生物大分子物质以一种亲水胶体形式存在于水溶液中，无外界影响时，呈稳定的分散状态。其主要原因是：蛋白质为两性物质，在一定的pH下表面显示一定的电性，由于静电排斥作用，使分子间表现为互相排斥而稳定；另外，蛋白质分子周围，水分子有序排列，在其表面上形成水化膜，水化膜层能保护蛋白质粒子，避免其因碰撞而聚集沉淀。原理：在溶液中加入一定量的中性盐，由于中性盐的亲水性比蛋白质（或酶）的亲水性大，盐离子在水中能与大量的水分子结合而发生水化，而使蛋白质脱去水化膜；同时由于中性盐的解离，中和了蛋白质（或酶）颗粒所带的电荷，颗粒间失去了相互的排斥力，在布朗运动下能够相互靠拢、聚集起来成为沉淀而析出。

影响蛋白质盐析效果的主要因素1234盐析剂种类溶液的pH值盐析剂的加入量温度5操作方式以及蛋白质（酶）的种类和浓度6搅拌

盐析剂的选择在蛋白质盐析中，一般阴离子的盐析效果比阳离子好，尤其以高价态阴离子更为明显。通常可以采用的盐析剂有硫酸镜、硫酸刷、硫酸镜和磷酸伺（铀〉等。但是在实际应用中，硫酸锻是最常用的一种盐析剂。主要是因为硫酸镀价格便宜、榕解度大，而且受温度影响小，具有稳定蛋白质的作用。但它在较高pH值溶液中容易释放氨，在贮存过程中常会变酸，对金属具有腐蚀性。

盐析剂的加入量盐析剂的用量与所沉淀的酶的种类和酶液中杂质的性质、数量有关，应以收率最高的用量为标准。具体用量需要通过对比实验和生产实践摸索才能确定。

温度和pH值除了盐析剂的种类外，盐析操作的温度和pH值是获得理想盐析沉淀的重要因素。盐析时的温度选择要以不降低酶的活力为原则，既要考虑保持酶的稳定性，也要适当地考虑盐析效果。大多数蛋白质都在室温下进行盐析。盐析的pH值选择也要以不降低酶的活力为原则。由于蛋白质在等电点时最容易沉淀，因此可选择等电点附近的pH值作为盐析pH。但为了防止pH值对酶活力的影响，可通过试验选择在酶稳定的pH值范围内进行盐析。

操作方式盐析时操作方式不同，会影响所需的盐量，也会影响沉淀物颗粒的大小，盐析操作条件要温和，不能引起蛋白质变性。

3.膜分离技术

膜分离技术以压力为推动力，依靠膜的选择性，将液体中的组分进行分离纯化的方法。这是人类最早应用的分离技术之一。如酿酒业中酒的过滤，从天然植物（中药）提取有效成分等。定义：

膜分离技术目前生产的膜过滤装置都是由膜组件或膜装置构成。一个膜装置由膜、固定膜的支撑物、间隔物以及收纳这些部件的容器构成。目前市售商品膜组件主要有管式、平板式、螺旋卷式和中空纤维式等四种。如图8-7所示为螺旋管式超滤膜组件构造。1、膜过滤装置组件

膜分离技术包括微滤（MF）、超滤（UF)、（反渗透RO）、透析