药品无菌检查及相关知识-李兵.pptx

药品无菌检查及相关知识

吉林省药品检验所微生物室

1、药品无菌检查法基础

2、2015年版药典无菌检查法的变动

3、洁净实验室微生物的监测和控制

4、菌种的管理

5、二级生物安全实验室

主要内容

·定义及特点

·培养基、冲洗液·方法学验证

·供试品的无菌检查·无菌检查的要点

药品无菌检查法

·无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。

·若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了

供试品在该检验条件下未发现微生物污染。也并不表示所有的产品都是无菌的。

·反之，当供试品中检出微生物污染，则可以认为批产品的微生物污染风险相当高。

药品无菌检查法

·无菌制剂比非无菌制剂存在更高的风险

·一系列的药品不良事件

·2006年的“欣弗事件”---安徽华源生产的“克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液”引起了11人死亡，93人感染，企业倒闭，总经理自杀。未按批准的工艺参数灭菌，降低灭菌温度、缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载量，影响了灭菌效果，经中检所检验，发现无菌不合格。

·2012年10月，美国新英格兰合成制药中心生产的注射用类固醇霉菌污染，造成数百人感染真菌脑炎，至年底统计死亡39人。

·这些事故促使无菌制剂GMP监管的进步，同时也对无菌检验提出更高更严的要求。

药品无菌检查法

·特点

·无菌检验结论为一次性，药典规定为不得复试，为什么不得复试，菌落的分布具有不均匀性，检验过程是破坏性的，不具有重复性。

--对操作过程的要求非常高。

=一=一

·过程的控制---------1、环境控制；2、操作影响，人员、物流是否引入外源性污染?

药品无菌检查法

SOP操作有效的方法方法学验证

有效的结果

结果判断

可靠的结论

无菌性检查

灵敏度检查

金

培养基保证

环境保证

过程控制

药品无菌检查法

·培养基

配制后采用验证合格的灭菌程序灭菌。

什么是验证合格的?

保存条件：2-25℃、避光，非密闭容器在3周内使用，密闭容器一般在1年内使用。

流乙醇酸盐流体：供试品接种前，培养基氧化层不超过深度的1/5,否则100℃水浴加热至粉红色消失(不超过20分钟),只能加热一次，培养结束后氧化层不超过1/2

药品无菌检查法

吉检

·培养基适用性检查

·无菌性一每批次培养基取不少于5瓶(支),培养14天，应无菌生长。

·灵敏度6种菌(100cfu)

金、铜绿、生孢---------流乙醇酸盐流体

7支，12ml/支，每种菌接种2支，阴性一支，

枯草、白念、黑曲--------胰酪大豆胨液体7支，每种菌接种2支，9ml/支，一支阴性

流乙醇酸盐流体培养3天，胰酪大豆胨液体5天，空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判断该培养基的灵敏度符合规定

药品无菌检查法

·冲洗液

·0.1%蛋白胨水溶液

·pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液

·可选用其他经验证过的适宜的溶液

药品无菌检查法

·方法适用性试验

证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。

菌种：金葡、大肠、枯草、生孢、白念、黑曲

方法：1、薄膜过滤

2、直接接种

药品无菌检查法

·薄膜过滤法

·试验组：取每种培养基规定接种的供试品

总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一

次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。将培养基加至滤筒内。

·对照组：另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，培养时间不得超过5天。

药品无菌检查法

试验组(供试品加菌)

流乙醇酸盐

对照组

流乙醇酸盐

试验组(供试品加菌)TSB

对照组

TSB

大肠生孢

黑曲枯草

金葡

白念

·直接接种法

取流乙醇酸盐流体培养基(不少于15ml)6管，分别加入金葡、大肠、生孢各2管，其中一管接入供试品，

另一管作为对照，TSB(不少于10ml)6管，分别加入枯草、白念、黑曲各2管，其中一管加入供试品，另一管作为对照，培养时间不得超过5天。

结果判断：

与对照管比较，试验组的试验菌生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或抑菌作用可以忽略不计；

如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长---供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用-----增加冲洗量、培养基用量、中和剂或灭活剂、更换滤膜品种，重新进行方法适用性试验。

药品无菌检查法

·供试