糖类脂肪蛋白质的鉴定.ppt

关于糖类脂肪蛋白质的鉴定（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定1.实验原理当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O第2页,共19页，5月，星期六，2024年，5月2.实验材料做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织有无色素是影响实验结果及其观察的最重要因素。因此要选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，其中以苹果、梨最好，也可用白萝卜替代。第3页,共19页，5月，星期六，2024年，5月3.试剂配制甲液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）斐林试剂乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液）甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。第4页,共19页，5月，星期六，2024年，5月4.实验步骤（1）制备组织样液（教师制备）（2）鉴定样液先在试管中加入2mL组织样液第5页,共19页，5月，星期六，2024年，5月再加入2mL刚配制的斐林试剂水浴煮沸2分钟注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！！！第6页,共19页，5月，星期六，2024年，5月还原糖检测实验的实验结果第7页,共19页，5月，星期六，2024年，5月（二）生物组织中脂肪的鉴定1.实验原理苏丹Ⅲ是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下可以看到细胞内橘黄色的颗粒。第8页,共19页，5月，星期六，2024年，5月2.实验材料做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。将花生种子经过3-4小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。3.试剂配制苏丹Ⅲ溶液：将0.1g苏丹Ⅲ干粉溶于100mL体积分数为95%的酒精溶液中，待全部溶解后即成。第9页,共19页，5月，星期六，2024年，5月4.实验步骤（1）切片制作①去掉花生种皮②用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（为什么？）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。③刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。）如此连续动作，切下一些薄片。第10页,共19页，5月，星期六，2024年，5月（2）染色用毛笔将最薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央→滴苏丹Ⅲ溶液2-3滴于花生子叶薄片上→2-1min后，吸去染液→滴50%的酒精洗去浮色→吸去多余酒精→再滴1-2滴蒸馏水→盖上盖玻片，制成临时装片。（3）镜检鉴定在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（最好只有1-2层细胞），移至视野的中心→换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来。第11页,共19页，5月，星期六，2024年，5月脂肪检测实验的实验结果第12页,共19页，5月，星期六，2024年，5月若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪。第13页,共19页，5月，星期六，2024年，5月（三）生物组织中蛋白质的鉴定1实验原理在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu2+作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。第14页,共19页，5月，星期六，2024年，5月3.试剂配制A液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）双缩脲试剂B液（0.01g/mL的硫酸铜溶液）2.实验材料做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆(可用豆浆替代）或鸡蛋清。第15页,共19页，5月，星期六，2024年，5月4.实验步骤：（1）制备生物组织样液（教师制备）（2）鉴定先加2mL组织样液再加2mL双缩脲试剂A液加3-4滴