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DB33/T2300—2020

单胞藻规模化培养技术规范

1范围

本标准规定了单胞藻规模化培养的培养条件和设施、培养方法、日常管理、收获和保存等内容。本标准适用于水产苗种培育和养殖生产中的单胞藻培养。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过规范性文件的引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期的对应版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB11607渔业水质标准

NY5051无公害食品淡水养殖用水水质

NY5052无公害食品海水养殖用水水质

3术语与定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

指数生长期

细胞迅速生长繁殖，藻细胞数量随着培养时间的延长呈几何级数递增的时期。

3.2

一级培养

以0.3L～5.0L广口瓶或三角烧瓶作培养容器，严格消毒，用滤纸封口的培养方式。

3.3

二级培养

用容积为50L～100L白塑料桶、尼龙袋、光生物反应器等作为培养容器，严格消毒，连续充气的培养方式。

3.4

三级培养

采用育苗场现有的水泥培养池、帆布池等作为培养容器，消毒，连续充气的培养方式。

4培养条件和设施

4.1培养用水

海水应符合GB11607、NY5052规定。

淡水应符合GB11607、NY5051规定。

4.2设施设备

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主要有蓄水池、沉淀池、过滤池、输水管、保种室、培养池、光生物反应器等设施。场地要求光线明亮，通风条件好，配备显微镜、生物培养箱、空调、冰箱等设备。配套供水、供气、供电设施。

4.3培养容器

一级培养的容器主要有0.3L～5.0L的三角烧瓶，二级培养主要采用10L～20L玻璃广口瓶、50L~100L白色塑料桶、光生物反应器等；三级大面积培养主要采用水泥池、帆布池等。

5培养方法

5.1器具消毒

5.1.1高温消毒法

5.1.1.1培养用的玻璃器皿和金属工具适用于煮沸消毒、烘箱干燥消毒、高压灭菌等高温消毒；

5.1.1.2培养用的充气管、散气石适用于煮沸消毒。消毒的方法见附录A。

5.1.2化学药品消毒法

5.1.2.1酒精消毒适用于手、镊子、瓶口的消毒。

5.1.2.2将高锰酸钾、漂白粉或漂白片、盐酸配成溶液适用于玻璃器具、塑料容器、充气管、散气石、玻璃缸、水泥池、管道等消毒。消毒方法见附录A。

5.2培养用水消毒

5.2.1加热消毒法

5.2.1.1一级培养用的水经砂滤、脱脂棉过滤，煮沸5分钟～10分钟，冷却后使用。

5.2.1.2二级培养用水经砂滤、250目筛绢袋过滤煮沸5分钟～10分钟，冷却后使用。

5.2.2漂白粉或漂白片消毒

5.2.2.1容积50L～100L塑料桶，加水后用漂白片消毒，有效氯浓度为20mg/L～50mg/L，中和去除余氯后使用。

5.2.2.2水泥池加水后泼洒80目过滤过的漂白水，有效氯浓度为15mg/L～30mg/L，中和去除余氯

后使用。

5.2.2.3光生物反应器直接注入有效氯浓度为50mg/L～100mg/L漂白水消毒，中和去除余氯后使用。光生物反应器长期培养藻类后消毒采用盐酸1000mg/L+250mg/L次氯酸钠混合消毒液在缓冲罐里，用水泵循环到管道里，消毒混合液可以重复使用。

5.3接种

5.3.1藻种质量

藻种应无污染，无杂藻、藻细胞无附壁。

5.3.2接种浓度

接种时间宜在早上6：00～10：00进行，藻种在指数生长后期，一级培养接种浓度为1：5～1：10；二级培养接种浓度1：10～1：50；三级培养根据天气、生产需要来接种，接种浓度1：15～1：30。

5.4培养条件

水产养殖常用微藻种类生态条件参数见附录B。

5.5培养液

常用培养液配方见附录C、附录D。

6日常管理

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6.1观察与处理

6.1.1观察

定期显微镜检查，从藻细胞的形态、悬浮、污染情况等了解细胞生长是否正常。注意观察藻液颜色，有无附壁、沉淀、菌膜和敌害生物，如发现异常应立即舍弃，并及时重新接种培养。

6.1.2一级培养

空调控温，光照用日光灯调节，每天摇晃藻种瓶4次～6次，培养用的消毒水应在5天～7天用完。

6.1.3二级培养

二级培养室保持采光良好，自然光照或人工光源，用遮光帘或遮阳布等设施，避免太阳光直射，充气量微沸、封口，定期用漂白水培养场所进行消毒。

6.1.4三级培养

控温，用遮光帘或遮阳布等设