无菌和无菌操作技术.pptx

项目六无菌和无菌操作技

术

■无菌：没有活的微生物存在的状态。

口无菌操作技术：用于防止微生物进入无菌范围造成污染的操作技术。

一、无菌的环境

二、无菌的器具、培养基

三、无菌操作技术口四、基本规则

一、无菌的环境

1、无菌室

2、超净工作台

3、生物安全柜

4、火焰周围

□标准无菌室的要求：

房间设置(外面有缓冲室)、空气过滤、墙面、墙角、微生物操作相关设备、紫外灯等。

1、无菌室

□如条件有限，可在微生物实验室内专辟一个小房间作为无菌室。可以用板材和玻璃建造，面积4-5平方米即可。

□超净工作台是一种提供

局部无尘无菌工作环境的垂直单向流型空气净

化设备。

□生物安全柜外形与超净台类似，也提供局部无尘无菌工作环境。但它设置了风槽，气流不会吹向使用者，可以有效

保护使用者。

通常使用酒精灯、煤气

灯，其火焰周围是无菌区域(直径10cm左右)。

这并不是利用高温杀死细菌，而是利用向上的单向气流形成一个无菌区域。

4、火焰周围

二、无菌的器具、培养基

□1、玻璃、金属等器具干热灭菌法

2、玻璃、金属、含水物品高压蒸汽灭菌法

3、金属、玻璃器具_火焰灭菌法

4、液体或水溶性物质过滤除菌法

■设备：电烘箱

用途：用于玻璃器皿、金属器具等耐热物品的烤干和灭菌。

条件：160-165℃,灭菌1-2小时。

□设备：高压蒸汽灭菌锅用途：培养基、生理盐水、废弃物、采样器、纱布、衣物的灭菌。

条件：121℃水蒸气

15分钟

2、玻璃、金属、含水物品等--高压蒸汽灭菌法

□即在火焰外焰上灼烧进行灭菌。

口用途：接种环、接种针;涂布器；试管管口、锥形瓶瓶口等的灭菌。

器具：细菌过滤器

口用途：不耐高温的液体、水溶性物质的除菌。

三、无菌操作技术

□我们通过一定的技术来

保证目的微生物、培养

基不被环境微生物污染

,这些技术就是无菌操

作技术。

包括手部清洁消毒，用

接种针、接种环、吸量

管、涂布棒等工具进行

各种操作等等。

1、手部清

洗手：手部有可见灰尘时、饭前、便后，用水和肥皂洗手；

Handrub(揉手):手部较清洁时，75%乙醇或者

醇基消毒剂揉手。

如何使用速干手消毒剂

使用含醇快速手消毒剂

旋转揉交换进行

20-30秒后

如何洗手

皂液和流动水

交换进行

40-60秒后

Rwothebacxolothhands.

RbcowshaainnnRrendytoo

动作：手掌-手背-指缝-

手指-拇指-指尖-手腕

heioctigesannbebackofimgesolsct

hetaceingesannohanstoeher

培养皿开合：单手打开和

盖上皿盖，

包括持皿法和皿加法两种。

此操作用于制作培养基平板、接种等。

3、接种环操作

包括灼烧接种环、接种、

划线等。

灼烧接种环

先斜放外焰灼烧接种环，

然后垂直放置后继续灼烧，再斜烧金属杆。

现在红外接种环灭菌器使用也比较广泛。

4.将已冷却的接种环

伸入菌液中，沾取一环菌液。

5.将试管口

通过火焰，并

塞上棉塞。

用接种环进行接种

用接种环进行划线

试管口

火焰，并

塞。

2.在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。

7.灼烧接种环，待其

冷却后，从第一区城

划线的末端开始往

第二区域内划线。重

复以上操作，在三

四、五区域内划线。

1.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。

6.左手

的接科

线，盖

4.将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。

8.将平板倒置，放入培养箱中培养。

3.将试管口通过

火焰。

A

灼烧灭菌：

可以沾酒精然后灼烧，灼烧范围要包括其杆部。

涂布：

将菌液滴在培养基表面中

央。右手拿涂布棒将菌液沿一条直线来回推动，然

后沿一垂直线来回推动，

平板边缘处可改变方向再涂几次。

SPREADPLATE

METHOD

Pour0.1mlontosurface

ofpre-pouredagar,then

spreadwithabentrod.

涂布

4.将已冷却的接种环

伸入菌液中，沾取一环菌液。

5.将试管口

通过火焰，并

塞上棉塞。

5、试管操作

单试管操作

(注意左右手的使用)

双试管操作

四、基本规则

不得留长指甲，头发需扎

好；

无菌操作中不要大声笑、

说话、打喷嚏、打闹。

手不要在无菌物上方越过；

要了解拿无菌物的位置，不触碰其之外的位置

不要将无菌物移出无菌范围。