DB21T 2469-2015 H1N1亚型猪流感病毒荧光RT-PCR检测方法　.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB21

辽宁省地方标准

21/T24692015

DB—

H1N1亚型猪流感病毒荧光RT-PCR检测方法

MethodoffluorescentRT-PCRforthedetectionofH1N1swineinfluenzavirus

2015-04-30发布2015-06-30实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2469—2015

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本标准主要起草人：关淼、曹东、兰德松、魏澍、赵凤菊、陈瑶、姚伟、刘坤洋、张雷、杨国丽、

魏园园

I

DB21/T2469—2015

H1N1亚型猪流感病毒荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了H1N1亚型猪流感病毒（swineinfluenzavirus，SIV）荧光RT-PCR检测方法的范围、

器材和试剂、引物和探针、操作步骤、结果判定和废弃物处理。

本标准适用于H1N1亚型猪流感的诊断、监测以及流行病学调查，适用于猪鼻咽棉拭子、肺脏及肺脏

淋巴结、鸡胚尿囊培养液以及细胞培养物中H1N1亚型SIVHA和NA基因的检测。

本标准中的试验操作应在生物安全Ⅱ级（BSL-2）以上的实验室进行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

兽医实验室生物安全技术管理规范

病原微生物实验室生物安全环境管理办法

GB/T27521-2011猪流感病毒核酸RT-PCR检测方法

GB/T27536-2011猪流感病毒分离与鉴定方法

3缩略语

本标准涉及下述缩略语。

SIV：猪流感病毒（swineinfluenzavirus）

荧光RT-PCR：荧光反转录聚合酶链式反应（realtimefluozescentquantitativereverse

transcriptionpolymerasechainreaction）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

cDNA：互补脱氧核糖核酸（complementaryDNA）

HA：血凝素（Hemagglutinin）

NA：神经氨酸酶（Neuraminidase）

PBS：磷酸缓冲液（配方见附录A）（phosphatebuffersolution）

DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）

4原理

SIV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据H1N1亚型SIV保