苏教版高中生物学选择性必修3生物学技术与工程课后习题 第三章 基因工程 专项练5 基因工程大题专练.docVIP

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专项练5基因工程大题专练

1.(徐州模拟)目的基因在酵母菌细胞中表达出的蛋白可能被细胞内的蛋白酶降解,某科研团队构建重组表达载体解决了此问题。下图为该重组表达载体构建示意图,图中改造了的目的基因序列融合了信号肽的核酸序列s和2个合成的核酸序列Z,信号肽能引导融合蛋白出胞,折叠后的Z肽段能与抗体IgG结合。请据图回答有关问题。

(1)Ori是基因组的复制起始序列,是酶的作用位点,该序列富含碱基对。?

(2)Plac是启动子序列,是酶的作用位点,转录沿DNA模板链的方向进行。?

(3)双酶切是构建表达载体的重要环节,下列关于双酶切的叙述正确的是。?

A.目的基因内不能含有所选的酶切位点

B.2个酶切位点距离越近酶切效果越佳

C.若2种限制酶最适温度相差较大,应实行2次单酶切

D.确保酶切位点一个产生黏性末端另一个产生平末端,方可避免载体自连。

(4)为使目的基因能定向插入载体,需对目的基因进行改造,通常的做法是设计P1、P2引物时在其接上不同的酶切位点(序列)。检验表达载体是否已经准确连接了目的基因,需对扩增的表达载体再次双酶切处理,完全酶切后经电泳处理,理想的结果有条条带。目的基因进入受体细胞后,可能存在的复制形式有。?

(5)菌种选育成功后,生产实践中可用含有的琼脂糖层析柱纯化融合蛋白。?

答案(1)解旋A—T

(2)RNA聚合3→5端

(3)AC

(4)5端2随载体进行复制;(整合到染色体DNA上)随染色体一起复制

(5)IgG

解析(1)DNA的复制需要解旋酶破坏氢键,复制起始序列和解旋酶结合,开始复制;该序列富含A-T碱基对,因此A—T之间只有两个氢键,G—C之间为三个氢键,A—T含量越多,氢键越少,双螺旋容易打开。(2)启动子是启动转录的地方,是RNA聚合酶识别和结合的位点,RNA聚合酶与启动子结合后可启动转录;RNA聚合酶只能识别DNA模板链的3端,因此转录沿着DNA模板链的3→5端方向进行。(3)目的基因内不能含有所选的酶切位点,否则容易被酶切而被破坏,A项正确;2个酶切位点距离越近,酶切容易混乱,难以得到两个不同的黏性末端,B项错误;若2种限制酶最适温度相差较大,应实行2次单酶切,否则同时用其中的一种酶容易失活,C项正确;使用两种不同的酶,使其产生两个不同的黏性末端,也能避免载体自连,不需要确保酶切位点一个产生黏性末端另一个产生平末端,D项错误。(4)为使目的基因能定向插入载体,目的基因的两端也应该有相应的酶切位点,因此在PCR时,在引物里(5端)应包含酶切位点;若表达载体已经准确连接了目的基因,则应含有原来两个酶切位点,因此再用相应的双酶切,能得到两个片段;目的基因进入受体细胞后,可以随载体进行复制,也可以整合到染色体上进行复制。(5)折叠后的Z肽段能与抗体IgG结合,因此生产实践中可用含有IgG的琼脂糖层析柱纯化融合蛋白。

2.(江苏盐城三模)三氯生是一种广谱抑菌物质,可用于基因工程中筛选含目的基因受体菌。某科研团队通过先筛选出一种对三氯生抗性较强的重组质粒(如图1),再将可以受温度调控的基因插入该质粒上,构建了温度调控表达质粒。回答下列问题。

图1

(1)利用从细菌中提取的DNA通过PCR技术获取fabV-A基因(或fabV-B基因)时,至少需经过次扩增可获得8个双链等长的目的基因。实验操作时,微量离心管中需加入的物质有:模板、引物、原料、。下图2为PCR产物的电泳结果,操作较理想的泳道有条。?

图2

(2)图1中,步骤Ⅰ需要的工具酶是;步骤Ⅱ常用的方法是用Ca2+处理使细菌成为;为达到步骤Ⅲ预期的筛选目的,所用物质X最可能为。?

(3)为获得一种增强大肠杆菌对三氯生的抵抗作用效果较好的重组质粒,将含有不同质粒的大肠杆菌分别接种到相应培养基中。培养一段时间后,结果如图3,则适宜选作构建温度调控表达质粒的是。?

图3

图4

(4)科研工作者对上述选出的质粒进行改造,获得了图4所示质粒。其中S1和S2是启动子,P1和P2是终止子。H基因在高温下会抑制S1,L基因在低温下会抑制S2。

①如果将lacZ基因和GFP(绿色荧光蛋白)基因插入图4质粒中,且使得低温下只表达GFP基因,高温下只表达lacZ基因,则lacZ基因插在之间,而GFP基因的插入位置及注意点是。?

②若以大肠杆菌为受体细胞,筛选上述①中插入GFP基因成功的受体细胞的依据是:大肠杆菌能在含的培养基中生长,且。?

答案(1)4缓冲液、Taq酶(热稳定的DNA聚合酶)4

(2)限制酶和