核酸的结构与功能—核酸的理化性质（生物化学）.pptx

核酸结构与功能生物化学

核酸的理化性质生物化学

核酸是含磷酸和碱基的两性电解质，通常表现为较强的酸性。可用电泳和离子交换分离纯化核酸。在碱性条件下，RNA不稳定，可在室温下水解。利用这个性质可以测定RNA的碱基组成，也可清除DNA溶液中混杂的RNA。核酸是线性的大分子，其在溶液中的粘度很高。RNA分子比DNA短，在溶液中的粘度低于DNA。一、核酸的一般性质

二、紫外吸收(一)由于嘌呤和嘧啶中含有共轭双键，核酸在260nm处有最大吸收峰。碱基的紫外光谱240250260270280波长(nm)2000400060008000100001200014000分子消光系数AMPGMPUMPCMPdTMP

1.DNA或RNA的定量OD260=1.0相当于：50μg/ml双链DNA40μg/ml单链DNA（或RNA）20μg/ml寡核苷酸2.判断核酸样品的纯度DNA纯品:OD260/OD280=1.8RNA纯品:OD260/OD280=2.0(二)OD260的应用

三、DNA的变性、复性与分子杂交(一)变性(denaturation)1.定义在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。本质是双链间氢键的断裂。3.变性后其他理化性质变化①OD260增高②浮力密度升高 ③粘度下降④酸碱滴定曲线改变⑤比旋度下降⑥生物活性丧失 (1)理化性质变化2.因素强酸，强碱，高温，高压，变性试剂如尿素以及某些有机溶剂如乙醇等。

(2)增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。DNA的紫外吸收光谱2002502603001.51.00.5波长(nm)吸光度值变性状态天然状态

(3)Tm：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(meltingtemperature,Tm)。其大小与G+C含量成正比。解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度为横坐标，以吸光度A260为纵坐标作图，所得的曲线称为解链曲线。768084889296100℃OD2600.700.650.600.550.50Tm

(二)复性1.DNA复性(renaturation)的定义(3)减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。(1)当变性因素去除后，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。(2)热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing)。

1.在DNA复性过程中，将不同种类的DNA单链分子或RNA分子置同一溶液中，就可以形成杂化双链(heteroduplex)。2.杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。(三)核酸分子杂交(hybridization)3.核酸分子杂交的应用（1）研究DNA分子中某一种基因的位置（2）确定两种核酸分子间的序列相似性（3）检测待检样品中是否存在某些专一序列（4）该方法是基因芯片技术的基础

DNA-DNA杂交双链分子变性复性不同来源的DNA分子