荧光荧光显微镜和荧光分光光度计课件PPT.pptVIP

荧光荧光显微镜和荧光分光光度计;;2常见荧光素：;;;3合适荧光素的选择：;4荧光显微镜（fluorescencemicroscope）

;

荧光光源：高压汞灯、氙灯或卤素灯

滤色系统：

激发滤色片：置于光源与物镜之间，用于选择激发光范

围，只有能激发荧光染料发光的特定波长

的光通过。

阻挡滤色片：物镜和目镜之间，选择性通过特异的荧

光，呈现专一的荧光色彩。

;透射光：照明光线从标本下经聚光器透过标本进入物镜。

落射光：照明光线从标本上经垂直照明器落射到标本，经标本反

射进入物镜。

;一天中应避免数次点燃光源。

（4）?关机后必须半小时（等氙灯温度降下）

赛默飞Lumina?FluorescenceSpectrometer

“+”—仅能见明确可见的荧光。

透射荧光显微镜光路(a)

依米丁、麻黄素、马钱子碱盐酸盐、毛果（芸香）盐酸盐、弗勒

大输至记录仪，激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动

色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸

光源单色器或滤光片样品池单色器或滤光片检测器

素B1、B2（核黄素）、B6、维生素BC(叶酸或蝶酰谷氨酸)、维生

素C、维生素D、维生素E(生育酚)、维生素P(芦丁)、维生素

核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。

叶绿素a、叶绿素b、脱镁叶绿素a和脱镁叶绿素b作为水环境浮游植

（1）免疫荧光技术

（3）?为延长仪器使用寿命，扫描速度、负高;（四）封裱剂?

??封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/l?pH9.0～9.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。

?

（五）镜油?

??一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。;6使用荧光显微镜的注意事项?;（5）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节?省时间，

保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始

就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后

才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。

（6）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标

本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间防止封

裱剂蒸发。?

（7）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“-”—无或可见微

弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明

亮的荧光。“+++”—可见耀眼的荧光。;

荧光分光光度计工作原理：

由光源氙狐灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发

光单色器变成单色光后，此光即为荧光物质的激发光，被测的荧光

物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照

射于测样品用的光电倍增管上，由其所发生的光电流经过放大器放

大输至记录仪，激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动

的凸轮所控制，当测绘荧光发射光谱时，将激发光单色器的光栅，

固定在最适当的激发光波长处，而让荧光单色器凸轮转动，将各波

长的荧光强度讯号输出至记录仪上，所记录的光谱即发射光谱

（emissionspectrum），简称荧光光谱。

;当测绘荧光激发光谱时，将荧光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处，只让激发光单色口的凸轮转动，将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪，所记录的光谱即激发光谱（emissionspectrum）。

当进行样品溶液的定量分析时，将激发光单色器固定在所选择的激发光波长处，将荧光单色器调节至所选择的荧光波长处，由记录仪得出的信号是样品溶液的荧光强度。;荧光分光光度计原理图;注意事项：

（1）?注意开机顺序。

?（2）?注意关机顺序。?

（3）?为延长仪器使用寿命，扫描速度、负高

压、狭缝的设置一般不宜选在高档。

（4）?关机后必须半小时（等氙灯温度降下）

方可重新开机。?;本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间防止封

依米丁、麻黄素、马钱子碱盐酸盐、毛果（芸香）盐酸盐、弗勒

物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照

4荧光显微镜（fluorescencemicroscope）

当测绘荧光激发光谱时，将荧光单色器的光栅固