转基因动物与生物反应器课件.ppt

第9章

转基因动物与动物生物反应器;转基因动物;转基因动物的命名;1982年,Palmiter生产超级小鼠

世界上第一只转基因动物:转入了生长激素基因的巨鼠（supermouse）;第一节：

转基因动物的培育;外源目的基因的制备

外源目的基因有效导入生殖细胞或胚胎干细胞

选择获得携有目的基因的细胞

选择合适的体外培养系统和宿主动物

转基因细胞胚胎发育及鉴定

筛选所得的转基因动物品系;哺乳动物生殖生理;一转基因哺乳动物的制备方法;1显微注射法;;受精卵;

a、转移率较高、整合效率达30%；

b、外源基因长度可达50Kb；

c、方法简单，导入过程直观；;

a、设备昂贵、操作复杂；

b、随机整合、首尾相连的多拷贝；

c、常造成插入位点附近宿主DNA大片段缺失、重组等突变，出现动物严重生理缺陷；

d、外源基因能否稳定整合要到子一代中筛选得到。;2．逆转录病毒载体感染法;逆转录病毒载体;;逆转录病毒感染法特点

优点：在各种转基因方法中，逆转录病毒感染法的转基因效率是最高的，且为单拷贝整合。

缺点：逆转录病毒载体在设计时虽然缺失了病毒的复制功能序列，但是复制大量载体DNA所需的辅助病毒基因组内有可能与目的基因一起整合到同一细胞核中，就可能大量复制病毒，造成严重的污染，故不安全。此外，逆转录病毒载体容量有限，只能转移小片段DNA（≦10kb），而且逆转录病毒长末端重复的甲基化状态常使转基因的表达缺失。

;3胚胎干细胞法;胚胎干细胞法建立转基因鼠的实验程序;09转基因动物与生物反应器-HXY;与传统育种方法相比较，ES细胞在生产转基因动物方面表现其独特的优势：

;4精子载体法;精子与外源DNA结合的机理;5YAC介导的基因转移;6细胞核移植技术;第二节：

转基因动物的应用;（1）动物品种改良;（2）生物制药(乳腺生物反应器);（3）建立人类疾病的动物模型;4）生产可移植用的动物器官;（5）基因治疗;（6）基因打靶;基因打靶的研究意义;胚胎干细胞介导的基因打靶技术;09转基因动物与生物反应器-HXY;基因敲除的基本程序;基因打靶流程;应用举例：肌肉生长抑制素基因

Myostatin基因敲除;比利???蓝牛肌肉增加表型;皮埃蒙特牛肌肉增加表型;Myostatin基因敲除“超级鼠”;美培育转基因鳟鱼：腹肌有6块,肉多15%;09转基因动物与生物反应器-HXY;2007年生理学或医学奖诺贝尔奖;09转基因动物与生物反应器-HXY;第三节：

动物乳腺生物反应器;1987年美国科学家戈登（Gordon）等人首次在小鼠的奶中生产出一种医用蛋白──tPA（组织型纤溶酶原激活物），展示了用动物乳腺生产高附加值产品的可能性。利用动物乳腺生产高价值产品的方式称为乳腺生物反应器。;微生物反应器

;1.动物乳腺生物反应器的制备;（2）目的基因的选择

选择目的基因的基本要求是，正常情况下浓度低、翻译后修饰复杂、其它表达体系难以表达或表达量低、应用前景广阔的蛋白基因。;（3）体外重组

选择好目的基因和启动子调控元件后进行体外重组，构建融合基因。;（5）胚胎移植

利用胚胎移植技术将制备的转基因受精卵植入待孕母体子宫内，生产转基因动物，得到转基因乳腺表达个体。通过采集转基因动物的乳汁,来获得目的基因表达产物。;2.动物乳腺生物反应器的优点;3.动物乳腺生物反应器的应用;4.动物乳腺生物反应器存在的问题

（1）外源基因在动物体内的位点整合问题

（2）乳蛋白基因表达组织特异性问题

（3）目的蛋白的翻译后修饰问题

（4）转基因表达产物的分离和纯化问题

（5）转基因的技术与方法问题

（6）伦理道德问题;动物;前景;研究展望;09转基因动物与生物反应器-HXY;携带人血清白蛋白基因的转基因试管牛“滔滔”;著名科学家谈家桢院士（左）、著名老中医徐蔚霖教授与曾溢滔院士在转基因牛“滔滔”模型前留影;09转基因动物与生物反应器-HXY;09转基因动物与生物反应器-HXY;Korea：Productionoftransgenicclonedpigs;09转基因动物与生物反应器-HXY;转基因鸡;美国公司研制出可当宠物出售的转基因荧光鱼;转基因花菜棉羊;;;;09转基因动物与生物反应器-HXY;;09转基因动物与生物反应器-HXY;09转基因动物与生物反应器-HXY;;思考题;谢谢聆听！