2025版高考生物二轮复习课件 限时练26 突破基因工程类大题.pptx

;1.(2024·厦门外国语学校调研)转录因子FOXO1与DNA结合可提高某些促凋亡基因的转录水平，促进神经元凋亡。让FOXO1基因发生定点突变，使其表达的蛋白第249位点的丝氨酸替换为天冬氨酸，用来模拟FOXO1被蛋白激酶Cdk5磷酸化后的状态。

(1)定点突变是利用PCR等方法，在引物中引入突变序列，从而实现目的基因的定向改造。以已有的质粒a0为模板(如图1，★代表突变位点)，将质粒a0定点突变成质粒a1。;①为了将突变序列准确地定位在目标序列上，引物部分序列应与FOXO1基因拟突变位点两端的序列______________________。将FOXO1基因与GFP(绿色荧光蛋白)基因进行融合的目的是_____________________________________________

__________________________________________________________________。;②天冬氨酸的密码子为GAC，丝氨酸的密码子为UCU，正向引物★处的碱基序列为___________。

③至少经过________轮PCR，可以得到发生定点突变的质粒a1??;④探究引物组合1与引物组合2扩增目的基因的效果，根据图2的实验结果分析，哪对引物更适合作为定点突变的引物？____________(填“引物组合1”或“引物组合2”)，另一引物组合没有扩增产物的原因可能是___________________________________________________________________

___________________________________________________________________。;(2)在过氧化物诱导下，Cdk5会磷酸化FOXO1249位点的丝氨酸，科研人员试图探究其在细胞内的分布是否会发生改变。将构建好的质粒a1转染进体外培养的原代神经元中，对照组的神经元需要转染质粒a0。一段时间后，发现对照组的绿色荧光主要集中在细胞核中，而实验组的绿色荧光滞留在细胞质中。推测FOXO1被Cdk5磷酸化后，对凋亡起到抑制作用的原理是____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________。;(3)为了使课题研究更加完善，现有以下两种实验思路，请补充完整。

思路1：还可对比(2)中对照组与实验组的________________________________

____________________________________________________________________。

思路2：利用某种药物抑制________________________，检测受过氧化物诱导后的FOXO1在细胞中的分布情况。;解析(1)①若要将突变序列准确地定位在目标序列上，引物部分序列应该与FOXO1基因拟突变位点两端的序列能够进行碱基互补配对。GFP(绿色荧光蛋白)可以发出绿色荧光，将FOXO1基因与GFP(绿色荧光蛋白)基因进行融合，以根据绿色荧光的分布，定位FOXO1被磷酸化后在细胞中的分布。②丝氨酸的密码子为UCU，图中该位点为AGA∥TCT，AGA对应的密码子为UCU，要想该密码子变为GAC，则AGA∥TCT要变为CTG∥GAC，正向引物★处与CTG互补配对，应为GAC。③至少经过2轮PCR可得到发生定点突变的质粒a1，第一轮PCR只改变了一条链上的碱基，第二轮PCR才会得到质粒a1。④分析图2可知，对照组(不加模板)和引物组合1组没有条带，引物组合2组有条带，说明引物组合2更适合作为定点突变的引物。引物组合1没有扩增产物的原因可能是引物组合1的两个引物碱基互补配对的部分占比较高，降低了与模板链结合的概率。;(2)将构建好的质粒a1转染进体外培养的原代神经元中，对照组的神经元转染质粒a0，一段时间后，发现对照组的绿色荧光主要集中在细胞核中，而实验组的绿色荧光滞留在细胞质中。再结合题干信息“转录因子FOXO1与DNA结合可提高某些促凋亡基因的转录水平，促进神经元凋亡”，推测FOXO1被Cdk5磷酸化后，对凋亡起到抑制作用的原理是FOXO1被Cdk5磷酸化后，无法进入细胞核，无法提高细胞核内某些促凋亡基因的转录水平。;2.(2024·江西九校联考)基因工程中的载体分为克隆载体和表达载体。克隆载体用来克隆和扩增DNA片段，而表达载体可使外源基因在宿主细胞中有效表达。胡萝卜抗冻蛋白基因(afp)是人类发现的第一个植物抗冻蛋白基因，对