天然药物提取、分离和鉴定技术（天然药物化学课件）.pptx

天然药物化学;2;初步定性

单项预实验

甾体皂苷

系统预实验

全面系统定性检查;极性递增

特有反应

试管、纸片、薄层、色谱;水浸液

室温或温热浸泡

糖类、苷类、有机酸、酚类

生物碱、氨基酸、蛋白质;6;除去叶绿素

醇溶醚萃取

活性炭吸附法;石油醚提取液

甾体、萜类、挥发油、油脂等;预实验的短处

假阳性

假阴性

低量物质漏检

新成分漏检;天然药物化学;11;12;13;14;15;16;17;18;19;20;21;22;23;24;25;26;27;28;29;30;31;32;33;34;35;36;37;38;39;40;41;42;43;44;45;46;47;48;49;50;51;52;（二）液滴逆流色谱，DCCC;54;;56;57;（四）高效毛细管电泳色谱;59;天然药物化学;61;（一）酸碱溶剂法

酸碱性差异

生物碱和非碱性难溶于水物质

含内脂或内酰胺的物质;两种不相混溶的两相溶剂

成分分配系数不同;64;提取液中加入试剂，使产生沉淀或溶质的溶解度降低，从而获得有效成分去除杂质的方法。;水提醇沉——去蛋白、糖

皂苷乙醇液加乙醚——逐级沉淀皂苷;某些成分与特定试剂产生沉淀，与其他物质分离

1.操作技术

提取液沉淀(溶解度降低)

滤过

特定试剂分离;2.适用范围

与某些试剂能生产沉淀的提取物成分

3.特点

沉淀反应可逆或不可逆;生物碱+生物碱沉淀试剂

水溶性季铵碱+雷氏铵盐

胆固醇+甾体皂苷

鞣质+蛋白质、明胶;（三）盐析法

水提液加无机盐

黄藤中提取防己碱

三颗针中提取小檗碱;透析膜可选择性透过物质

分子量的差异使之分离;72;73;74;利用沸点不同进行分离

1.操作技术

分馏装置;;2.适用范围

沸点相差较小的液体混合物

挥发油、液体生物碱;3.特点

操作简单，加热可能破坏某些成分

4.提示

保持适当的温度，严格控制热源温度;成分溶解度的差别

KNO3

NaCl;80;81;82;83;84;（5）重结晶

重复结晶过程

（6）干燥

单个溶剂不能达到要求时，选用混合溶剂

;天然药物化学;量少

波谱学方法为主

综合多种手段

;一、化合物纯度的测定

前提

外形

熔点、沸点

TLC、PC、GC或HPLC;二、研究结构的主要程序

初步判断

分子式

官能团

平面结构

立体结构;三、常用波谱技术

UV

IR

NMR

MS;（一）UV-vis

饱和碳氢化合物σ→σ*

???原子n→π*

共轭双键、α,β-不饱和羰基、芳香化合物n→π*或π→π*

;（一）UV-vis

辅助手段

黄酮、香豆素

;（二）IR

4000~625cm-1

1250cm-1

完全相同则极有可能

确认构型（螺甾烷的25位）;已知物的重要手段

对照品法

图谱检索;（三）质谱

质谱图

有机质谱仪

;1.电子轰击质谱

EI-MS

碎片信息多

分子离子峰有时不出;2.化学电离质谱

CI-MS

利用气体CH4、H2得到准分子离子峰

碎片离子峰少;3.场解吸质谱

FD-MS

样品吸附于金属丝

[M+1]+、[M+Na]+、[M+K]+

电流低，碎片峰少

;4.快原子轰击质谱

FAB-MS

样品分散于基质、中性原子束轰击产生离子

可得到高分辨质谱;5.基质辅助激光解吸电离质谱

激光电离

飞行时间不同形成质谱

结构复杂、不易气化的多肽、蛋白质;6.电喷雾电离质谱

ESI-MS

常与HPLC联用

喷雾形成液滴、然后溶剂挥发、离子被捕捉

目前常用的一种;7.串联质谱

MS-MS

可多级;（四）磁共振谱

NMR

H、C、N、F、P

一维、二维、三维;1.磁共振氢谱

1H-NMR

化学位移

偶和常数

质子数（峰面积）

;认识氢谱;化学位移δ

参比物质TMS

醛基9.5~10.5、糖端基4.5~6.5

烷基0.8~1.3、烷氧基3.3~3.5

双键、羰基和芳环上甲基1.6~2.5

炔氢2~3、烯氢5~7、芳氢6~9

活泼氢不定，加D2O消失

;认识氢谱;;认识偶合常数J;偶合与峰的裂分数;;;;芳香氢的偶合;2.磁共振碳谱

13C-NMR

（1）噪音去偶谱

（2）偏共振去偶谱

INEPT谱和DEPT谱;3.二维磁共振谱

（1）1H-1HCOSY

（2）13C-1HCOSY

HSQC谱和HMQC谱

（3）HMBC谱

（4）NOESY谱

;（5）TOCSY谱;（五）旋光光谱和圆二色光谱

ORD和CD

手性化合物的绝对构型、优势构象

;1.旋光光谱

偏振光照射

横坐标：波长。

纵坐标：比旋光度、摩尔比旋度

;（1）平坦曲线

正性（左高右低）

负性（相反）;（2）C