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高效液相色谱仪的原理液相色谱工作原理

高效液相色谱仪的原理：

调配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温

度、压力有关。在不同的色谱分别机制中，K有不同的概念：吸附

色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数（或称交换系

数），凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用调配系数来表示。

在条件（流动相、固定相、温度和压力等）确定，样品浓度很

低时（Cs、Cm很小）时，K只取决于组分的性质，而与浓度无关。

这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正

常峰；在很多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖

尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。

因此，只有尽可能削减进样量，使组分在柱内浓度降低，K恒定时，

才能获得正常峰。

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仪器使用：

高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限

制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分别热

不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物

质。

与试样预处理技术相搭配，HPLC所达到的高辨别率和高灵敏度，

使分别和同时测定性质上特别相近的物质成为可能，能够分别多而

杂相体中的微量成分。随着固定相的进展，有可能在充分保持生化

物质活性的条件下完成其分别。

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HPLC成为解决生化分析问题Z有前途的方法。由于HPLC具有

高辨别率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收

集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药讨论、环

境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用

是一个紧要的进展方向。

液相色谱—质谱联用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农

药和多核芳烃等；液相色谱—红外光谱联用也进展很快，如在环境

污染分析测定水中的烃类，海水中的不挥发烃类，使环境污染分析

得到新的进展。

该仪器应用特别广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

1、分别混合物：高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受

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样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，

因而可以分别热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种

分子量范围的物质。

通过与试样预处理技术相搭配，高效液相色谱法所达到的高辨

别率和高灵敏度，可分别并同时测定性质上特别相近的物质，能够

分别多而杂混合物中的微量成分。并且随着固定相的进展，还可在

充分保持生化物质活性的条件下完成对其的分别。

2、生化分析：由于高效液相色谱法具有高辨别率、高灵敏度、

速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛

应用到生物化学、食品分析、医药讨论、环境分析、无机分析等各

种领域，并已成为解决生化分析问题Z有前途的方法。

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3、仪器联用：高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个紧要的

进展方向。高效液相色谱一质谱联用技术受到普遍重视，如分析氨

基甲酸酯农药和多核芳烃等：高效液相色谱一红外光谱联用也进展

很快，如在环境污染分析测定水中的烃类等．使环境污染分析得到

新的进展。

液相色谱仪分别的目的必需特别明确的几点

液相色谱仪分别的目的必需特别明确，下面的问题在建立方法

之初就应确定：

（1）紧要目的是什么？定量或定性，还是定性、定量同时做？；

（2）是否有必要解析出样品的全部成分？譬如可能有必要分别

出产品中的全部降解物或杂质，以使含量测定结果更加牢靠，但却

没必要将它们彼此完全分开。

（3）如要求定量分析，精准度与精密度需多大？样品紧要成分

的精密度通常能达到±1—2%，特别是不需样品预处理的情况。

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（4）特别化合物可能会以不同的样品形式显现（如：原材料药，

一种或多种形态，环保样品等）。是否需要一种以上的HPLC方法？

单一方法分别不同形态样品是否理想？

（5）一次将分析多少样品？当必需同时处理大量样品时，运行

时间将变得特别紧要。