紫外-可见分光光度法.doc

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第七章吸光光度法

7.1概述

7.1.1

吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择性吸收的特点而建立起来的分析方法，它包括比色分析法、可见及紫外吸收光度法以及红外光谱法等。本章着重讨论可见光区的吸光光度法（又称分光光度法，简称光度法）。

定义：基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸光光度法，包括比色法，可见分光光度法及紫外分光光度法等。

比色分析法：许多物质是有颜色的，例如高锰酸钾在水溶液中呈深紫色，Cu2+在水溶液中呈蓝色。这些有色溶液颜色的深浅与这些物质的浓度有关。溶液愈浓，颜色愈深。因此，可以用比较颜色的深浅来测定物质的浓度，这种测定方法就称为比色分析法。

目前已普遍地使用分光光度计进行比色分析。应用分光光度计的分析方法称为分光光度法。这种方法具有灵敏、准确、快速及选择性好等特点。

吸光光度法试液的浓度下限：10-510-6mol/L。

吸光光度法测定的相对误差：2%—5%，可以满足微量组分测定对准确度的要求。

7.1．2特点

分光光度法同化学分析法中的滴定分析法、重量分析法相比，有以下特点：

1.灵敏度高

分光光度法测物质的浓度下限（最低浓度）一般可达10-5~10-6mol/L，相当于含量低于0.001~0.0001%的微量组分。如果将被测组分加以富集，灵敏度还可提高1~2个数量级。该方法适用于微量组分的测定。

2.准确度较高

一般分光光度法的相对误差为2~5%。

3.操作简便，测定速度快

分光光度法的仪器设备不复杂，操作也简便。如果采用灵敏度高，选择性好的显色剂，再采用掩蔽剂消除干扰，可以不经分离直接测定，而且速度快。7.2基本原理

7.2.1光的基本特性

物质呈现的颜色与光有着密切的关系。

光是一种电磁波，如果按照波长或频率排列，则可得电磁波谱图（四师P.275表10-1）。光具有两象性：波动性和粒子性。

波动性就是指光按波动形式传播。

例如：光的折射、衍射、偏振和干涉现象，就明显地表现其波动性。

λ·ν=c

式中：λ—波长（cm）；ν—频率（赫兹）；c—光速（≈3×1010

光的粒子性：如光电效应就明显地表现其粒子性。光是由“光微粒子”（光量子或光子）所组成。光量子的能量与波长的关系为：

E=hν=hc/λ

式中：E—光量子的能量（尔格）；ν—频率（赫兹）；h—普朗克常数（6.6262×10-34J·秒）

.光色的互补关系

首先要明确什么叫单色光、复合光、可见光。

理论上将具有单一波长的光称为单色光；由不同波长的光组合而成的光称为复合光；人眼能感觉到的光称为可见光（其波长范围大约在400~750nm之间）。

日光、白炽灯光等可见光都是复合光。

如果让一束白光（日光）通过棱镜，于是发生折射作用，便分解为红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等颜色的光。（各色光之间没有明显的界限）。

各种色光的近似波长（见课件）。反之，这些颜色的光按一定强度比例混合便能形成白光。

如果把两种适当颜色的单色光按一定强度比例混合后，就能得到白光。我们便称这两种单色光为互补色光。

日光、白炽灯光等就是一对对互补色光按一定适当比例组合而成的。互补色光的关系可用右图表示。

7．2.2.物质对光的选择吸收

对固体物质来说，当白光照射到物质上时，如果物质对各种波长的光完全吸收，则呈现黑色；如果完全反射，则呈现白色；如果对各种波长的光均匀吸收，则呈现灰色；如果选择地吸收某些波长的光，则呈现反射或透射光的颜色。

对溶液来说，溶液呈现不同的颜色是由于溶液中的质点（离子或分子）对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。

当白光通过某种溶液时，如果它选择性地吸收了白光中某种色光，则溶液呈现透射光的颜色，也就是说，溶液呈现的是它吸收光的互补色光的颜色。

例如：当一束白光通过硫氰酸铁（Fe(SCN)3）溶液时，它选择性地吸收了白光中的蓝青色光，其它色光均透过溶液。

铜铵络离子的溶液因选择地吸收了白光中的黄色光而呈现蓝色。

溶液呈现不同颜色乃是由于物质对光的选择吸收所造成的。

当一束白光（强度为I0）通过下列几种溶液，溶液呈现的颜色和吸收光的关系如下图：

如果将各种波长的单色光依次通过某一固定浓度的有色溶液，测定每一波长下有色溶液对光的吸收程度（即吸光度A），然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得一曲线，称为吸收光谱曲线（简称吸收曲线）。是四个不同浓度KMnO4溶液的光吸收曲线。从图上可以看到：

⑴KMnO4溶液对不同波长的光吸收程度不同。

⑵不同浓度KMnO4溶液的吸收曲线形状相似，最大吸收波长不变。

⑶同