生物化学实验课件课件课件.ppt

实验八维生素C的定量测定第117页,共127页，星期六，2024年，5月一、实验目的1、学习维生素C定量测定法的原理和方法2、熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术第118页,共127页，星期六，2024年，5月二、实验原理还原型维生素C(抗坏血酸)能还原染料2,6-二氯酚靛酚钠盐，本身则被氧化成脱氢维生素C。2,6-二氯酚靛酚钠盐的水溶液呈蓝色，在酸性环境中为玫瑰色，被还原后则脱成无色。(反应式见P196图)第119页,共127页，星期六，2024年，5月本实验用2,6-二氯酚靛酚在酸性环境中滴定含有维生素C的样品溶液。滴定开始时，样品液中的维生素C立即将滴入的2,6-二氯酚靛酚还原脱色，当样品液中维生素C全部被氧化时，再滴入的2,6-二氯酚靛酚就不再被还原脱色而呈浅玫瑰色，达到滴定终点。此时，记录滴定所消耗的2,6-二氯酚靛酚标准液量，按公式即可计算出样品液中还原型维生素C的含量。第120页,共127页，星期六，2024年，5月三、器材及试剂1、器材：研钵吸管(10ml）容量瓶（50ml）锥形瓶（50ml）微量滴定管（5ml）漏斗纱布滤纸药物天平2、试剂：新鲜果蔬样品(绿豆芽、桔子、青椒)；10%盐酸溶液；2,6-二氯酚靛酚溶液(不得超过3天)；1mg/mL标准维生素C溶液(新配制)；2%草酸溶液；10%盐酸酸化的蒸馏水第121页,共127页，星期六，2024年，5月四、实验步骤1、制备含维生素C的样品液称取50g绿豆芽(37℃发芽3-7天)置研钵中研磨，放置片刻(约10min),用2层纱布过滤，将滤液(如混浊可离心)滤入50mL容量瓶中。用10%盐酸酸化的蒸馏水定容，混匀，备用。样品(桔子、青椒)洗净，吸干水分称取20g加2%草酸溶液10mL打成浆状取浆状物5g加2%草酸溶液定容至50mL用2层纱布过滤取滤液备用第122页,共127页，星期六，2024年，5月2、标定2,6-二氯酚靛酚溶液取2ml标准维生素C溶液加入9ml的2%草酸溶液，然后用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微玫瑰红色持续15秒不退为终点。计算2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每mL2,6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数来表示。同时以10ml的2%草酸溶液做空白试验。第123页,共127页，星期六，2024年，5月3、样品液滴定1)量取样品液10ml于锥形瓶中，用微量滴定管，以2,6-二氯酚靛酚溶液滴定样品液，呈微弱的玫瑰色持续5秒不退为终点，记录所用2.6-二氯酚溶液的mL数。整个滴定过程不要超过2分钟。(因为很多干扰性还原物质与2,6-二氯酚靛酚的反应比较缓慢)2)另取10mL用10%盐酸酸化的蒸馏水做空白实验对照滴定。3)样品液和空白对照各做三份，取其平均值。（当样品中维生素C含量大于20mg/mL时，两次读数的误差＜2%；当样品中维生素C含量小于20mg/mL时，两次读数的误差＜5%）4)计算结果第124页,共127页，星期六，2024年，5月五、实验结果记录1、原始数据记录样品量W0(g)标定2,6-二氯酚靛酚溶液时所消耗的2,6-二氯酚靛酚体积S0(mL)滴定样品液时所消耗的2,6-二氯酚靛酚体积Vi(mL)第125页,共127页，星期六，2024年，5月2、数据计算处理维生素Cmg数/100g样品=W=10W0/50(g)S＝1/S0（mg/mL）VA为滴定样品液所用的2,6-二氯酚靛酚的mL数VB为滴定空白对照所用的2,6-二氯酚靛酚的mL数S为1mL2,6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数(VA-VB)×SW×100第126页,共127页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第127页,共127页，星期六，2024年，5月三、器材及试剂1、器材：水浴锅温度计容量瓶锥形瓶吸管试管吸管架试管架2、试剂：0.4%酪蛋白醋酸钠溶液：1.0mol/L醋酸溶液,0.1mol/L醋酸溶液，0.01mol/L醋酸溶液，蛋白质溶液，pH4.7HAc-NaAc的缓冲溶液，3%硝酸银溶液，5%三氯乙酸溶液，乙醇，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵结晶粉末，0.1mol/L盐酸溶液，0.1mol/L氢氧化钠溶液，0.05mol/L碳酸钠溶液，甲基红溶液，2%氯化钡溶液第85页,共127页，星期六，2024年，5月四、实验步骤(一)蛋白质的等电点的测定1、取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确的加入各试剂，然后混匀。(注意：在测定等电点实验中，要求各种试剂的浓度和