梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程.doc

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医院检验科免疫室

梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程

文件编号：

生效日期：年月日

版本：第1版

第页，共页

检验申请

单独检验项目申请：梅毒螺旋体抗体（缩写TPELISA）测定。临床医生根据需要提出检验申请。

标本采集与处理

2.1标本采集

2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本

2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存

2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到3000rpm15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。

2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的标本。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项

采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。

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3．方法原理

本试剂盒用梅毒螺旋体抗原包被反应板，用梅毒螺旋体抗原标记辣根过氧化物酶，应用双抗原夹心法原理，检测人血清或血浆样本中的梅毒螺旋体抗体。

4．试剂及其他用品

4.1试剂：梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒，由上海科华生物技术有限公司出品，试剂盒药品批准文号：国药准字96人份)。

未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。微孔反应板打开包装后，应立即将未试用的板条装入有干燥剂的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。未使用完的酶结合物、阳性对照、阴性对照、洗涤液、显色剂A、显色剂B和终止液，在没有其他试剂污染的情况下，保存于原试剂瓶，并拧紧瓶盖，置2-8℃中避光保存，可使用至标签标识有效期。

4.2试剂盒组分

微孔反应板阴性对照

阳性对照酶结合物

显色剂A显色剂B

终止液洗涤液（蒸馏水1：25稀释）

说明书封片

4.3其他试剂及用品

加液器：型号。

离心机：型号。

温箱（或水浴箱）：型号。

洗板机：型号。

酶标仪：型号。

5．室内质控与室内质控规则

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5.1质控品：采用卫生部临床检验中心临床免疫室免疫质控血清，浓度

mIU/ml。

5.2质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20℃冻存，复融后充分颠倒混匀。

5.3质控品测定：在每一次（板）标本中测定质控血清。

5.4质控规则：绘制质控图，求出SD和CV值。

6．标本检测步骤

（1）洗涤液配制：将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作1：25稀释。

（2）加样：

加入100μl待测样本和阴、阳性对照于反应孔中（共预留5孔做为对照孔，建议设阴性对照3孔、阳性对照1孔、显色剂空白对照1孔，用户也可自行调整。）。用封片覆盖反应板后，将反应板置37℃孵育60分钟。

（3）洗板

手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30-60秒，甩干，重复5次后，在干净的吸水纸是上拍干。

洗板机洗板：采用洗板机洗板，选择洗涤5次程序，用配置的工作浓度洗涤液注满每孔，每次工作浓度洗涤液在反应微孔中的停留时间为30-60秒，并确保每次吸净无残留，洗完后在干净的吸水纸上拍干。

（4）在已加入待测样本和阴、阳性对照的孔中加入100μl酶结合物。混匀，