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粘虫αFTZ-F1和βFTZ-F1基因功能鉴定

中文摘要

粘虫Mythimnaseparata(Walker)隶属于鳞翅目(Lepidoptera)夜蛾科(Noctuide)，主

要危害水稻、小麦、玉米等禾本科作物。核受体因子调控昆虫蜕皮、发育、生殖以及

形态构建等过程，因此关于核受体的研究成为近年来昆虫学领域的研究热点之一。本

文基于粘虫转录组数库获得αFTZ-F1和βFTZ-F1两个核受体因子，利用玉米介导的

RNAi技术探讨其在粘虫发育中的功能，可为粘虫防治提供理论依据。主要研究结果如

下：

1.粘虫αFTZ-F1和βFTZ-F1序列特征分析

本文基于粘虫转录组数据库获得αFTZ-F1和βFTZ-F1unigene序列，其开放阅读框

分别为1695bp和2292bp，分别编码564和763个氨基酸残基，包括保守DNA结合

域（DBD）和配体结合域（LBD）。通过聚类分析结果显示，αFTZ-F1和βFTZ-F1分别

和甜菜夜蛾Spodopteraexigu、草地贪夜蛾Spodopterafrugiperd和斜纹夜蛾Spodoptera

litura聚为一支。确定这两个基因均为核受体家族成员。

2.粘虫αFTZ-F1和βFTZ-F1时空表达模式的构建

利用RT-qPCR技术测定αFTZ-F1和βFTZ-F1在粘虫5龄至6龄不同发育阶段和5

龄不同组织的mRNA表达水平。结果显示αFTZ-F1和βFTZ-F1基因在粘虫5龄至6龄

的不同发育阶段均有表达。两个基因均在5龄48h的表达量最高，与其他时期有极显

著差异（P0.01），6龄72h表达量次之。组织表达谱结果显示，αFTZ-F1和βFTZ-F1

在粘虫7个不同组织均有不同程度的表达。头部αFTZ-F1的表达量最高，与其他组织

有极显著差异（P0.01），表皮的表达量次之；表皮的βFTZ-F1表达量最高，与其他组

织有极显著差异（P0.01），次之为头部。两个基因都在前肠和中肠中低水平表达，与

其他组织有极显著差异（P0.01）。

3.粘虫αFTZ-F1和βFTZ-F1功能分析

本研究成功构建玉米介导的αFTZ-F1和βFTZ-F1基因RNAi体系，并设置实验组

(TRV2-αFTZ-F1、TRV2-βFTZ-F1)和空白对照组，以及阴性对照组，各个对照组都设3

个生物学重复，每个重复处理10头同批的2龄幼虫。利用RT-qPCR技术测定αFTZ-F1

和βFTZ-F13龄、4龄、5龄和6龄第2天幼虫的mRNA水平，记录粘虫4龄和5龄的

发育历期和致死率，并观察表型。

在3~6龄4个龄期中，αFTZ-F1实验组的mRNA水平极显著低于对照组（P0.01），

对照组之间的mRNA水平无显著差异（P0.05），3-6龄期幼虫的沉默效率分别为75%，

33%，61%，40%；实验组4龄幼虫的发育历期与对照组无显著性差异（P0.05），而5

龄幼虫发育历期显著长于对照组（P0.05）。在幼虫期实验组的死亡率与对照组没有显

著性差异（P0.05），无明显死亡表型。化蛹过程出现3种致死表型，包括无法形成前

蛹、无法正常化蛹和发育成缺陷型蛹，死亡率为35.08%。

同样，βFTZ-F1实验组的mRNA水平极显著低于对照组（P0.01），对照组之间的

mRNA水平无显著差异（P0.05），3-6龄期幼虫的沉默效率分别56%，45%，58%，

51%。发育历期和幼虫期死亡率同αFTZ-F1沉默效果相似，化蛹时蛹翅处无法形成完

整的蛹皮而死亡，死亡率为35.98%。表明βFTZ-F1可能参与翅区域的蛹皮的形成。

本文建立了粘虫αFTZ-F1和βFTZ-F1的时空表达模式，通过基因沉默技术发现，

αFTZ-F1影响前蛹的正常发育，βFTZ-F1可能参与蛹翅区域蛹皮的形成。

关键词：粘虫；αFTZ-F1；βFTZ-F1；RNA干扰

FunctionalIdentificationofαFTZ-F1andβFTZ-F1genein