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常用缓冲液的配置方法

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缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH

值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓

冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时

蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。

在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系

pH值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，

会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。

由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、

碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要

慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中

的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反

应。

硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。

柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。

磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶

液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。

三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺

点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在

37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而

且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。

缓冲液的pH值由哪些因素决定？

设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度

为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式：

根据此式可得出下列几点结论：

（1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的

比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。

（2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。

（3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般

地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。

从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）

时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人

的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附

录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算

处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。

经查表知pH5.8浓度为0.2MNa2HPO48.0毫升，而0.2MNa2HPO492.0毫升。依此可推论出

配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1MNa2HPO48.0毫升，而0.1MNa2HPO4需要需要92.0毫升。

所以500ml0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为:

需Na2HPO4量为:

计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，

加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。

各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，

如醋酸、NaOH等

1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M）

Xml0.2M甘氨酸+Yml0.2M盐酸再加水稀释至200ml

pHX/mlY/mlpHX/mlY/ml

2.25044.03.05011.4

2.45032.43.2508.2

2.65024.23.4506.4

2.85016.83.6505.0

甘氨酸分子量＝75.070.2M甘氨酸溶液含15.01g/L

2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05M）

Xml0.2M邻苯二甲酸氢钾+Yml0.2M盐酸再加水稀释至200ml

pHXYpHXY

2.254.6703.251.470

2.453.9603.450.990

2.653.2953.650.59