薄层色谱法的发展.pdf

英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也。——《三国演义》

薄层色谱分析法的应用和发展

一、薄层色谱分析在层析分离过程中的应用

生物技术、新型材料技术、信息技术是当今科技发展的前沿,在某种程度

上甚至可以代表一个国家的科学技术发展水平。层析分离过程是生化产物分离

和纯化的重要手段之一,作为生物技术产业化进程中的“下游技术”往往成为

技术和经济的关键,直接关系到产品的产量和质量,其成本经常占到总成本的

60%～90%[2]。因此,层析分离过程的优化和控制就显得十分重要。薄层色

谱分析方法,因其具有分析迅速快、成本低廉、可现场操作等特点在层析分

离过程中不可缺少。

1.薄层色谱分析的优越性

薄层色谱分析方法和高效液相色谱分析方法均遵循层析分离的基本原理,

因此,层析分离过程的中间控制性分析和分离后的最终产物的检验,用上述两

种分析方法是非常适合的。高效液相色谱分析方法的精度高、分离效能高、选

择性高、检测器灵敏度高,比较适合最终产物的检验。虽然高效液相色谱也

可用于中控分析,但是分析检验的成本非常高，需要设置专业人员进行分析操

作。由于样品在分析前需要预处理,得到分析结果的时间相对较长,对于层析

过程的中间控制就显得不够及时,同时过高的分析精度也没有必要。薄层色谱

分析方法在对层析分离过程控制性分析中就显示出了很高的优越性。

2.薄层色谱片的制作和分析操作

用于层析分离过程的中间控制性分析的薄层色谱片可以在专业试剂商店买

到,如果在实验室自己制备则可节约80%的成本,同时可以根据分析的实际需

要灵活地调整固定相薄层的配方。固定相通常用GF254硅胶和一定比例的纤维

素配合而成。将固定相的浆料均匀地涂布在毛玻璃片上，经烘干活化后即可使用。

每片薄层可以分析多个样品，重复使用几次。经毛细管点样、在层析缸用展开剂

展开后，在紫外分析仪上可观察到非常清晰的分析结果，一次分析过程基本可

控制在10min左右，现场操作人员经短时间的培训就可掌握。

3.薄层色谱分析对层析分离过程的优化

应用薄层色谱进行层析中间控制分析，选用展开剂和确定不同展开剂的比例

是薄层分析的关键。展开剂的确定一般需要以下几个前提条件：

（1）层析前的样品要经过高效液相色谱分析，获得较高的分离度。

（2）确定样品中各组份的组成，明确层析分离要得到的主产物。

（3）层析分离过程的操作方法及洗脱剂的配比要基本确定,各组份的洗脱次

序要明确。

（4）层析分离要得到主产物的纯度要规定一个在工艺上比较合理的范围（关

系到最终的收率和产品质量）。

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（5）层析分离后的主产物和副产物要经过高效液相色谱分析，确定产物的含

量。

其中（1）和（2）通常也是必不可少的工艺条件，可以和薄层色谱分析结果

相互印证。在上述前提条件具备后，可以根据样品的理化性质，选用几组常用的

展开剂，分别用层析前和层析后的样品进行试验。选定一组分离效果较好的再进

行微调,以围绕主产物能获得一个较好的分离度为准。所获得的分离度并非越

高越好,因为通常情况下最初确定的层析分离过程本身为薄层分析提供了足够

的时间和组份之间的空间。我们利用薄层分析方法对层析过程进行监控的另一个

很重要的一个目的在于，减少这种时间和空间，从而缩短层析分离过程的时间、

降低洗脱剂的用量，扩大最终产品的利用空间。薄层分析