DB45T 2353-2021 猪主要病毒性腹泻鉴别检测 多重反转录聚合酶链反应法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

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广西壮族自治区地方标准

DB45/T2353—2021

猪主要病毒性腹泻病毒鉴别检测多重反

转录聚合酶链反应法

Differentialdetectionofmajorporcineviraldiarrheaviruses—AmultiplexRT-PCR

2021-07-27发布2021-08-31实施

广西壮族自治区市场监督管理局发布

I

DB45/T2353—2021

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 2

5材料准备 2

6操作方法 3

6.1操作环境 3

6.2待检样品处理 3

6.3待检样品总RNA提取 3

6.4RT反应 3

6.5PCR扩增 3

6.6阴性及阳性对照 4

6.7扩增产物电泳检测 4

7结果判定 4

附录A（规范性）引物序列、扩增片段及结果判定 6

附录B（规范性）重组质粒标准品制备 8

II

DB45/T2353—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并宣贯。

本文件由广西畜牧业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：广西壮族自治区动物疫病预防控制中心。

本文件起草人：施开创、冯淑萍、尹彦文、陈芳芳、粟艳琼、屈素洁、陆文俊、莫胜兰、李军。

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DB45/T2353—2021

猪主要病毒性腹泻病毒鉴别检测多重反转录聚合酶链反应法

1范围

本文件规定了采用多重反转录聚合酶链反应法鉴别检测猪主要病毒性腹泻病毒的材料准备、操作方法、结果判定等要求。

本文件适用于广西行政区域内猪主要病毒性腹泻病毒的鉴别检测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

猪主要病毒性腹泻swinemainviraldiarrhea

由病毒引起的急性消化道传染病，以厌食、呕吐、腹泻、脱水为主要特征，其主要病原有猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒。

3.2

猪冠状病毒porcinecoronavirus

为有囊膜的单股正链RNA病毒，主要包括猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）以及猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）。

3.3

猪轮状病毒porcinerotavirus，PoRV

属于呼肠孤病毒科轮状病毒属成员，为双股多节段RNA病毒。3.4

反转录reversetranscription，RT

以RNA为模板合成互补脱氧核糖核酸（cDNA）的过程。3.5

聚合酶链反应polymerasechainreaction，PCR

一种在体外快速扩增特定脱氧核糖核酸（DNA）片段的方法。热变性复性延伸三步反应组成一个循环，经多次循环反应，使目的DNA得以大量扩增。

3.6

多重聚合酶链反应multiplexpolymerasechainreaction，Multi-PCR

简称多重PCR，是PCR技术的一种形式。同一反应体系中加入多对引物，同时扩增多个模板的PCR技术。

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DB45/T2353—2021

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PDCoV：猪德尔塔冠状病毒（porcinedeltacoronavirus）

PEDV：猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus）PoRV：猪轮状病毒（porcinerotavirus）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

TGEV：猪传染性胃肠炎病毒（porcinetransmissiblegastroenteritisvirus）

5材料准备

5.1试剂

5.1.1特异性引物

引物序列见附录A中的表A.1，上游、下游引物的使用浓度均为