生物物理技术等温微量量热法.ppt

第32页,共51页，星期六，2024年，5月三.ITC方法的应用蛋白质-蛋白质相互作用：抗原-抗体相互作用，分子伴侣-底物相互作用，等等。蛋白质-小分子相互作用，酶-抑制剂相互作用蛋白质-核酸相互作用核酸-核酸相互作用核酸-小分子相互作用生物分子-细胞相互作用DNA/RNA-药物相互作用酶促反应动力学蛋白质折叠/去折叠RNA折叠第33页,共51页，星期六，2024年，5月1.研究Ras，Cdc42与底物（effector）的结合ThermodynamicsofRas/EffectorandCdc42/EffectorInteractionsProbedbyIsothermalTitrationCalorimetryHerrmannC.,J.Biol.Chem.276:23914-23921(2001).Ras是一种在信号传导过程中起重要作用的蛋白质，可以向其下游的许多信号传导途径输送细胞内调控信号。Ras在非激活态与GDP结合，当GDP被GTP取代时被激活，与底物（Raf，RalGDS,3-磷脂酰肌醇激酶）发生紧密的结合。Cdc42是一种GTPase,也是信号传导相关的蛋白，它参与细胞增殖调控和肌动蛋白细胞骨架的调控。CdC42在参与细胞骨架调控的过程中，重要的一步是与WASP蛋白的相互作用。第34页,共51页，星期六，2024年，5月第35页,共51页，星期六，2024年，5月6μM50μM6μM50μM第36页,共51页，星期六，2024年，5月第37页,共51页，星期六，2024年，5月第38页,共51页，星期六，2024年，5月第39页,共51页，星期六，2024年，5月第40页,共51页，星期六，2024年，5月Structureandcharacterizationofanovalchickenbiotin-bindingproteinA(BBP-A).HytonenV.P.,etal.BMCStructuralBiology,7:8(2007).BBP—A是一种类抗生素蛋白（AVD）,具有β折叠的结构，对BTN具有高亲和力，但具有不同于其他抗生素蛋白家族成员的热稳定性和免疫学特性。BBP—A拥有特异的结合BTN和BSO的配体结合特性，目前作为生物工艺学新材料得到应用。2.检测BBP—A和AVD与BTN和BSO结合能力的差异第41页,共51页，星期六，2024年，5月ITCanalysisofbBBP-AandAVDforBindingBTNandBSO:AVD-BTN,AVD–BSO,(c)AVD-D-biotinsulfone,(d)bBBP-A–BTN,(e)bBBP-A–BSO(f)bBBP-A–D-biotinsulfone第42页,共51页，星期六，2024年，5月3.其它一些应用例子第43页,共51页，星期六，2024年，5月蛋白质-蛋白质相互作用第44页,共51页，星期六，2024年，5月蛋白质-配体相互作用WrightandSerpersu,Biochemistry,44:11581-11591(2005).妥布霉素是一种对革兰氏阴性菌、多种革兰氏阳性菌有作用的氨基糖苷类抗生素氨基糖苷核苷转移酶妥布霉素第45页,共51页，星期六，2024年，5月蛋白质-配体相互作用CooperA,etal.,FEBSLett.348:41-45(1994).SAM---腺苷甲硫氨酸第46页,共51页，星期六，2024年，5月LiJ.andWeisR.M.(1996)蛋白质-受体相互作用第47页,共51页，星期六，2024年，5月三链DNA的形成Kamiyaetal.,JACS118:4532-4538（1996）.第48页,共51页，星期六，2024年，5月多个结合部位Fengetal.,Nat.Struc.Biol.,11:450-454(2004)Mn2+与核酸酶的结合第49页,共51页，星期六，2024年，5月寡聚体解离第50页,共51页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第51页,共51页，星期六，2024年，5月关于生物物理技术等温微量量热法内容ITC方法的基本原理ITC方法的主要优点ITC方法的主要应用第2页,共51页，星期六，2024年，5月一.ITC方法的基本原理生物分