人教版 选择性必修3 高中生物 2.2.1动物细胞培养 课件.pptxVIP

动物细胞融合技术与单克隆抗体

01动物细胞融合技术概述

1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。

2.原理：细胞膜具有一定的流动性

3.诱导融合的常用方法：电融合法

PEG融合法

灭活病毒诱导法

病人体内的病毒等因素诱导了多

个体细胞融合形成了多核细胞。

19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、

天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象?

动物细胞融合技术概述

紫外线灭活丧失感染活性(不感染细胞)

1保留融合活性(诱导细胞融合)

灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，

但是并不破坏病毒的抗原结构。

动物细胞融合技术概述

病毒

灭活病毒诱导细胞融合的原理：

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。

1965年，研究证实了灭活的病毒在适当

条件下确实可以诱导动物细胞融合。

动物细胞融合技术概述

4.细胞融合的过程

获得分散的细胞

(胰蛋白酶处理)

诱导融合(杂种细胞)物理法：电融合法

化学法：聚乙二醇PEG

生物法：灭活病毒诱导法

5.结果：形成的单核杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。

动物细胞融合技术概述

动物细胞融合技术概述

6.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能

7.应用：(1)细胞融合技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。

(2)利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。

动物细胞融合

VS

植物体细胞杂交

植物体细胞杂交动物细胞融合

原理的流动性、植细胞膜具有一定的流动性

细胞融合前的用果胶酶和纤维素酶去除细用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细

处理方法胞壁胞分散成单个细胞

诱导细胞融合的方法

电融合法、离心法；聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca²+-高pH融合法

PEG融合法、电融合法、灭活

病毒诱导法

细胞融合成功的标志

再生出细胞壁细胞核的融合

结果获得完整的杂种植株形成杂交细胞，生产细胞产

意义

打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种

凝破了有性杂交的局限，使

远缘杂交成为可能

物细胞的全能性

细胞膜具有一定

02单克隆抗体

1.早期获得抗体的方法

向动物体内反复注射某种抗原，从动物血清中分离所需抗体

缺点：产量低、纯度低、特异性差

2.单克隆抗体

(1)概念：化学性质单一、特异性强的抗体

(2)理论基础：每一个B细胞只分泌一种特异性抗体

(3)存在的问题：

每一个B淋巴细

胞只分泌一种特异性抗体

大量纯度高特异性强的抗体

B淋巴细胞不可能无限增殖

单—B淋巴细胞

细胞群

产

生

选择

隆

单克隆抗体

1975年英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上，充分发挥想象力，发明了单克隆抗体的制备技术，于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖

米尔斯坦

【英国】

科勒

【德国】

单克隆抗体

2.单克隆抗体

(4)单克隆抗体的制备思路

一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体

骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖

动物细单克隆抗体胞培养

杂交瘤细胞：既能迅速大量增殖，又能产生抗体

动物细胞融合

杂交瘤细胞

培养获取的单克隆产生特定抗体

骨髓瘤细胞抗体的杂交瘤细胞

EFG

③在获取C步骤杂交瘤细胞的过程中，筛选淘汰了哪些细胞?

已免疫的杂交瘤

B淋巴细胞细胞

ABC

把产生特定抗体的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔

H

体外培养产生特定抗体的杂交瘤细胞

D

单克隆抗体

注射特定的抗原，小鼠脾产生特定抗体的淋巴B细胞

多种B细胞

诱导融合

多种杂交细胞

培养骨髓瘤细胞

将骨髓瘤细胞和B细胞融合

不能产生抗体，但能大量增殖

骨髓瘤细胞

能产生抗体，

但不能大量增殖

免反动物

融合类型：瘤-瘤、B-B、B-瘤

单克隆抗体

将抗体检测呈阳性的

杂交瘤细胞在体外大

规模培养或者注射小

鼠腹腔中增值

体外培养

抗体检测呈阳