基础医学试验技术与示范操作的实践指导.pptxVIP

基础医学试验技术与示范操作的实践指导本课程旨在为学生提供基础医学试验技术的实践指导，帮助学生掌握实验的基本原理、操作方法和注意事项。通过示范操作，学生可以直观地学习实验步骤，并进行实际操作练习，提高实验技能和分析问题的能力。

实验室基本要求整洁环境实验室必须保持整洁，防止污染，确保实验安全。仪器设备配备必要的实验仪器设备，并定期维护保养，确保仪器运行正常。安全防护实验人员需穿戴防护服和手套，使用安全设备，确保个人安全。生物安全严格遵守生物安全管理规定，防止生物污染和传播。

实验仪器的使用与维护1仪器熟悉使用前必须详细了解仪器的操作说明书，熟悉仪器功能、性能和注意事项。2日常维护定期清洁仪器表面和内部，更换滤芯和消耗品，保持仪器清洁、干燥、通风。3故障处理及时发现并排除仪器故障，对于无法解决的故障，应联系专业维修人员进行维修。

生物安全与防护措施生物安全意识重视生物安全，了解生物安全风险，遵守操作规范。个人防护佩戴实验服、手套、护目镜等防护用品，避免直接接触生物样本。废物处置严格按照规定处置生物废物，避免污染环境和传播疾病。应急处理熟悉应急预案，并进行相应的应急演练，确保安全。

样本采集与处理样本类型样本类型包括血液、组织、细胞、体液等，根据研究目的选择合适的样本类型。采集方法选择合适的采集方法，例如静脉采血、组织活检、细胞培养等，确保样本质量和安全性。样本处理样本采集后需进行及时处理，包括保存、标记、运输等，防止样本降解或污染。样本储存根据样本类型选择合适的储存条件，例如冷藏、冷冻、液氮等，确保样本长期稳定性。

细胞培养技术1细胞准备选择合适的细胞系2培养基准备配置适宜的培养基3无菌操作严格的无菌操作4培养环境控制温度、湿度和气体浓度细胞培养技术是基础医学研究的重要方法。其基本流程包括细胞准备、培养基准备、无菌操作和培养环境控制。细胞准备包括选择合适的细胞系，并进行细胞复苏、传代和冻存。培养基准备则需要根据细胞类型配置不同的培养基，并添加相应的生长因子和抗生素。无菌操作是确保细胞培养成功的关键，需要严格的消毒灭菌。培养环境控制包括温度、湿度和气体浓度，以模拟细胞的生理环境。

细胞计数与活力检测计数活力细胞计数与活力检测是细胞培养中的重要步骤，常用的方法包括台盼蓝染色法、血球计数板法和流式细胞术。台盼蓝染色法是一种简单快捷的方法，但准确性较低。血球计数板法相对准确，但操作繁琐。流式细胞术是一种高度敏感和精确的方法，可用于检测细胞计数、活力、细胞周期和凋亡等。

细胞分离与纯化细胞分离与纯化是基础医学试验中常见的技术，其目的是从混合细胞群中分离出特定类型的细胞，以进行后续实验研究。1物理方法离心、过滤、磁珠分离2免疫学方法抗体标记、流式细胞术3其他方法密度梯度离心、激光捕获显微切割选择合适的方法进行细胞分离与纯化，需要根据细胞类型、实验目的和样本类型进行综合考量。

蛋白质提取与定量1细胞裂解利用合适的裂解液破坏细胞膜，释放蛋白质。裂解液的成分应根据蛋白质性质选择。2蛋白质沉淀去除细胞碎片等杂质，并富集目标蛋白质。常用方法包括盐析、有机溶剂沉淀等。3蛋白质定量使用BCA法、Bradford法等方法测定蛋白质浓度，以便后续实验操作的准确性。

蛋白质电泳与免疫印迹1蛋白质分离SDS电泳，根据蛋白质分子量分离2转膜将蛋白质从凝胶转移到膜上3封闭封闭膜上的非特异性结合位点4抗体孵育使用特异性抗体识别目标蛋白5显色通过化学反应或发光信号检测目标蛋白蛋白质电泳和免疫印迹是常用的蛋白质分析技术。蛋白质电泳将蛋白质按分子量分离，免疫印迹则利用抗体特异性识别目标蛋白，并通过显色或发光信号进行检测。

核酸提取与检测核酸提取是现代分子生物学研究的基础，也是许多医学诊断和科研工作的关键步骤。1样本收集血液、组织、细胞2核酸裂解破坏细胞膜，释放核酸3核酸分离利用不同的物理和化学性质分离核酸4核酸纯化去除杂质，获得纯净核酸5核酸定量测定核酸浓度和纯度核酸检测是通过各种方法对提取到的核酸进行分析，常用的方法包括聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR、基因测序等。

聚合酶链式反应(PCR)原理PCR是一种体外扩增DNA片段的技术，利用DNA聚合酶在特定引物的引导下，将目标DNA片段进行指数级复制。步骤PCR包括三个主要步骤：变性、退火和延伸，循环往复进行，最终将目标DNA片段扩增到可检测的浓度。应用PCR应用广泛，包括基因诊断、基因克隆、亲子鉴定、病原体检测等，在生物医学研究中发挥重要作用。注意事项PCR操作需要严格无菌，防止污染，确保实验结果的准确性。选择合适的引物和反应条件对于PCR的成功至关重要。

实时荧光定量PCR实时荧光定量PCR(qPCR)是一种强大的分子生物学技术，用于定量分析特定基因或DNA片段的拷贝数。它结合了