修改后终稿实验设计-2014学科竞赛实验设计.docVIP

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目录

TOC\o1-3\h\z\u一、研究依据与研究内容 1

1、研究依据 1

2、研究内容、研究目标，以及拟解决的关键科学问题 2

2.1研究内容 4

2.2研究目标 4

2.3拟解决的关键科学问题 4

3、拟采取的研究方案及可行性分析 4

3.1技术路线 4

3.2研究方案 6

3.3关键技术 12

3.4可行性分析 12

4、本研究的特色与创新之处 14

5、研究计划及预期研究结果 15

5.1研究计划 16

5.2预期研究结果 16

二、研究基础与工作条件 17

1、研究基础 17

2、工作条件 18

麦冬多糖对急性心肌缺血性损伤的作用研究

一、研究依据与研究内容

1、研究依据

心血管疾病是危害人类健康最普遍、最严重的疾病，患病率为各疾病之首，病死率仅位于恶性肿瘤之后。近年来随着人口老龄化的加剧，心血管疾病的发病率及其致残、致死率明显上升。心血管疾病通常是由于冠脉血供与心肌需求之间失衡，引起心肌代谢功能的障碍与结构损伤，可表现为冠状动脉狭窄、闭塞，最终导致功能异常甚至梗死。心肌缺血性疾病的发生和发展是涉及多种机制共同参与的复杂过程。其中最常见的为冠状动脉粥样硬化引起的急性心肌缺血、缺氧[1-3]。心肌缺氧会引起心肌细胞代谢过程紊乱，尤其是能量物质的生成锐减，正常心功能难以维持，心肌收缩性减弱，心肌舒张功能障碍等[4]，又因血流中断，有害的产物难以清除。因此心肌缺血的根本防治措施是通过改善血流动力学、血液流变学、调节血管活性物质、钙平衡、保护线粒体、抑制细胞凋亡、清除自由基、促进血管新生等多方面发挥抗心肌缺血作用[5]。

目前国内外通过如硝酸酷类、钙通道阻滞剂和β-受体阻断药等传统抗心肌缺血药物治疗，以及冠脉造影（GAG）、冠脉支架植入（PCI）、冠脉旁路移植（CABG）等手术治疗和介入治疗，使心血管疾病死亡率呈现逐年下降趋势[6-8]，但这些治疗方法通常只能局部恢复缺血心肌的血流灌注，而不能修复或逆转已经坏死的心肌组织，且再灌注在一定程度上也可造成心肌细胞的再次损伤[9]，因此这些治疗方法并不能从根本上解决缺血缺氧对心肌细胞的损伤。

近年来国内外的研究发现，中药有不同程度的保护心肌的作用，因此中药治疗心血管疾病的研究成为了现代药理研究的热点之一。随着中药提取技术的不断完善，单味中药提取物的临床应用也越来越广泛，效果提高的同时，不良反应也控制良好。中药保护心肌的作用是一个整体的、复杂的过程，主要是对血小板活性、微循环、抗氧自由基、调节一氧化氮（NO）的释放等发挥作用，增强内源性抗损伤能力，促进机体生成保护心肌的物质，改善心肌代谢状态[10]。多糖是许多中药的主要免疫活性物质，是由10个以上单糖通过糖苷键连接而成的聚糖。越来越多的研究证明，多糖能治疗多种疾病，且无明显毒副作用，来源广泛[11]，因而多糖的研究越来越受重视。

中药麦冬是百合科（Liliaceae）多年生草本植物沿阶草属（OphiopogonKerGawl）植物麦冬（Ophiopogonjaponicus）（Lf）KerGawl的干燥块根，味甘、微苦、性微寒。入心、肺、胃经。有养阴生津，润肺清心[12]的功效。国内外的研究表明，麦冬的主要化学成分为多糖、甾体皂苷、高异黄酮类、氨基酸，β-谷甾醇、豆甾醇、配糖体化合物、环二肽类化合物、酰胺类化合物、多羟基脂肪酸和酚酸类化合物等，具有多种药理作用，可以增加机体耐缺氧能力；具有抗心律失常的作用；能降血糖，并能促进使胰岛细胞的恢复；提高机体免疫功能[13]等作用。而麦冬多糖作为麦冬的主要成分之一，对其的药理作用的研究表明，麦冬多糖的药效也主要集中在免疫活性、降血糖、抗心肌缺血、抗过敏[14-15]等方面。

注射大剂量ISO诱导大鼠心肌损害模型，在心电图、心肌代谢及组织病理学变化等方面均与人类自然发生的急性心肌梗塞非常相似[16-17]。ISO诱导的大鼠心肌缺血模型是评价心肌保护药物的常用模型之一[18]。

血管内皮细胞是细胞与血液物质交换的一层屏障,而且具有分泌功能,它可以通过血液流动、凝血以及运输大分子和炎症细胞介导局部组织的平衡[19]，因此血液有害物质损伤机体时，常常先受累,所以在对心脑血管内皮细胞的研究中被常常用来作为的模型载体。H2O2可诱导细胞的氧化损伤，而氧化反应可以参与内皮细胞病理变化的各个环节，在血管性疾病的病理过程中起非常重要的作用。

本研究一方面拟通过ISO诱导大鼠急性心肌损伤，研究麦冬多糖对在体心肌细胞的保护作用，另一方面，以H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的细胞模型为研究对象，研究麦冬多糖对离体细胞的凋亡以及氧化损伤的作用，